toll样受体4在内毒素诱导的小鼠心肌炎症因子表达和左室功能不全中的作用-老年心血管病专业论文.docxVIP

中国人民解放军总医院 中国人民解放军总医院 博士学位论文 英文缩略词表 军医进修学院 中国人民解放军总医院 中国人民解放军总医院 博士学位论文 英文缩略词表 军医进修学院 PBs燮逮 phosphate～墓墅逊——一蔓鹜逊一——bu虢r solution 磷酸盐缓冲液 PCR 口01vmerase chain reaction 多聚酶链反应 RT reverse也mscription 反转录 TIR T0ll IL，1receptor Toll IL-1受体 TNF．n tumor necrosis factor alpha 肿瘤坏死因子d TLR4 TollIjke receptor 4 Toll样受体4 1垦墅 旦!!!!堕!!!!!竺!! 旦!!登翼箜 2 中国人民解放军总医院 中国人民解放军总医院 博十学位论文 中文摘要 军医进修学院 To|l样受体4在内毒素诱导的小鼠心肌炎症因子表达 和左室功能不全中的作用 摘要 目的 内毒素，又称为脂多糖(LPS)，是革兰氏阴性菌的主要致病成分， 常常可以引起心功能不全等严重并发症而影响患者预后。LPs引起心功能 不全的分子机制尚未完全阐明。炎症因子TNF吨和IL．1B的过量表达是 LPS引起心功能抑制的重要原因之一，然而，LPS诱导心肌局部炎症因子 产生的分子机制也尚属未知。TLR4是近年新发现的LPS受体，在LPs 的胞内信号转导过程中起重要作用。本研究旨在探讨TLR4在LPs诱导的 心肌局部炎症因子表达过程中以及心功能抑制发生中的作用。 材料和方法 1、以雌性TLR4突变型小鼠C3删eJ和野生型小鼠c3删eN为研 究对象。通过腹腔注射纯化LPs(5mg瓜g，n=5)的方法，建立小鼠内毒 素血症模型。对照组小鼠腹腔注射无LPS生理盐水。在24小时内定期观 察小鼠的整体反应，评价注射LPs(25mgmg)36小时后小鼠(n=lO)的 生存率。LPs注射2小时检测小鼠血清炎症因子TNF．a、lL-1p的含量 (n_5)，6小时后检测小鼠血清中的BUN、Cr、AST和血糖浓度(n=5)， 24小时后检测动脉血气(n=5)。用RT．PCR方法从C3H／HeJ小鼠心肌中 扩增出包含TLR4突变点的DNA片段，产物进行基因测序。 2、用RT．PcR和免疫组织化学方法对LPS注射前后e3耐HeJ和 c3H／HeN小鼠心肌中TNF—cL、IL．1B基因和蛋白水平的表达以及TLR4在 LPS注射前后的变化进行检测(n=5)。做HE染色，进行常规组织检查了 解炎症细胞浸润情况。 3、用改良的心室穿刺测压法即经膈左心室穿刺测压法进行小鼠血流 中囝人民解放军总医院 中囝人民解放军总医院 博士学位论文 中文摘要 军医进修学院 动力学监测。常规HE染色及MaSson染色进行小鼠心肌形态学检查(n=5)。 以注射生理盐水的c3H／}IeN小鼠为对照，对LPs注射前和注射后 (25mg瓜曲6小时的c3H，HeJ和C3H，HeN小鼠的心率、左室最大收缩压、 左室舒张末压和+dp／山。。a11d．dp／dr。。进行监测(n=5)。 4、统计处理数据用均数±标准差表示。用SPSS 10统计软件包进 行统计处理。LPs注射前后血生化指标和血流动力学指标的差异用不配对 ，检验，LPS诱导的不同时间点炎症因子表达之间的差异用单因素方差分 析(0ne．way a11alysis of variallce，ANOVA)。p0．05表示差异具有统计学 意义。 结果 1、腹腔注射LPs后半小时，c3H／HeN小鼠开始出现全身毒性反应如 毛发竖立、呼吸困难、腹泻以及体重减轻。50％的c3H／HdN小鼠在LPS 注射36小时后死亡。LPs注射后2小时，c3删eN小鼠血清中TNF—q、 IL一1B浓度明显增加。6小时后，小鼠血浆BUN，cr，AsT和血糖明显升高， 表明小鼠器官功能轻度受损和代谢紊乱，24小时动脉血氧分压、血氧饱 和度、Hc03。及pH值降低，提示小鼠出现低氧血症和代谢性酸中毒。上 述指标的变化提示LPs己引起小鼠出现明显的全身炎症反应。在观察期 间，C3 H，，HeJ未出现任何异常表现，表明其对LPS耐受。RT-PCR产物基 因测序结果证明本研究所用c3删eJ小鼠存在TLR4基因突变。 2、R1lPCR和免疫组化研究结果显示，TLR4在小鼠心肌中表达。LPs 注射后24小时，C3删dN小鼠心肌上TLR4mI矾A和蛋白的表达明显增 加。而C3H／HeJ小鼠心肌未出现TLR4表达的上调。注射LPS后，C3H，HeN 小鼠心肌上出现下NF．旺和IL