Toll样受体7在HBV感染中作用及相关机制的研究-免疫学专业论文.docxVIP

广州医学院硕士学位论文To 广州医学院硕士学位论文 Toll 样受体 7 在 HBV 感染中作用及相关机制的研究 PAGE PAGE 10 影响的研究，阐述 TLR7 在乙型病毒性肝炎发病中的作用。通过检测 TLR7 介导 的慢性乙肝患者外周血单个核细胞产生 IFN-α，IL-12 含量的改变，探讨慢性 HBV 感染对免疫细胞 TLR7 功能的损伤及意义，阐述 TLR7 在慢性 HBV 感染中的作 用及可能的机制，以期为 TLRs 介导的固有免疫的研究提供参考资料，为寻找治 疗乙肝的新靶点和新药的开发提供初步实验依据。 研究目的 1. 通过 TLR7 特异性配体 Loxoribine 刺激 HepG2.2.15 细胞株的研究，探讨 TLR7 介导的体外抗 HBV 作用及机制。 2. 通过检测 TLR7 特异性配体 Loxoribine 刺激 HBV 转染前后的 HepG2 和 HepG2.2.15 细胞株 TLR7 的表达，探讨 HBV 转染对 TLR7 表达及调控的影 响，阐述 TLR7 在乙型病毒性肝炎发病中的作用。 3. 通过检测 TLR7 介导的慢性乙肝患者外周血单个核细胞产生 IFN-α，IL-12 含 量的改变，探讨慢性 HBV 感染对免疫细胞 TLR7 功能的损伤及意义，阐述 TLR7 在慢性 HBV 感染中作用及机制。 研究方法 1. 选用能稳定分泌 HBV 颗粒和 HBV 抗原标志物的 HepG2.2.15 细胞株为 HBV 转染的细胞模型，应用 ELISA 及实时荧光定量 PCR 法检测 TLR7 特异性配 体 Loxoribine 对 HepG2.2.15 细胞 HBsAg，HBeAg 分泌和 HBV DNA 复制的 抑制作用，探讨 TLR7 介导的体外抗 HBV 作用。 2. MTT 比色法检测 TLR7 特异性配体 Loxoribine 刺激对 HepG2.2.15 细胞的毒 性作用。 3. 流式细胞术检测 HepG2，HepG2.2.15 细胞株胞内 TLR7 蛋白的表达水平，及 特异性配体 Loxoribine 诱导对其表达调控的影响。 4. ELISA 法检测 TLR7 特异性配体 Loxoribine 刺激慢性 HBV 感染患者和健康 人外周血单个核细胞产生 IFN-α，IL-12 含量的改变，评价慢性 HBV 感染对 免疫细胞 TLR7 功能的影响。 研究结果 1. 在 TLR7 特异性配体 Loxoribine 作用下,可有效抑制 HepG2.2.15 细胞 HBsAg 的分泌及 HBV DNA 的复制，对 HBsAg 分泌的抑制作用呈剂量和时间依赖 性。对 HBeAg 的分泌无抑制作用。 2. 低浓度 Loxoribine 对 HepG2.2.15 细胞生长有一定抑制作用，但随着配体浓度 增高，对细胞生长无明显毒性作用。 3. HepG2 和 HepG2.2.15 细胞胞内均有 TLR7 表达，但转染了 HBV 全基因组的 HepG2.2.15 细胞胞内 TLR7 的表达量明显低于未转染的 HepG2 细胞。TLR7 特异性配体 Loxoribine 诱导后 HepG2 和 HepG2.2.15 细胞胞内 TLR7 表达量 均有增加，但差异无统计学意义。 4. 乙肝病毒携带组及慢性乙肝患者组外周血单个核细胞培养上清液中 IFN-α 水 平明显低于健康对照组；慢性乙肝患者组 IL-12 水平明显高于健康对照组； 乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组间，PBMC 培养上清液中 IFN-α 和 IL-12 水平无明显差异。 5. TLR7 特异性配体 Loxoribine 刺激培养后，健康对照组外周血单个核细胞培 养上清液中 IFN-α，IL-12 水平显著升高，乙肝病毒携带组及慢性乙肝患者组 IFN-α，IL-12 水平亦均有升高，但差异无统计学意义。 结论 1. 特异性配体 Loxoribine 有较显著的抗 HBV 作用，其对 HBV 的抑制可能是 TLR7 介导作用于病毒复制及蛋白合成等环节。 2. HBV 感染抑制了 TLR7 的表达，特异性配体 Loxoribine 诱导则可发挥显著的 抗 HBV 作用，即 TLR7 表达下调可能参与了乙型病毒性肝炎的发病。 3. 慢性 HBV 感染患者外周血单个核细胞 TLR7 功能受损，INF-α 产生水平低下， IL-12 调节功能紊乱，这可能是导致 HBV 持续感染的重要原因。 关键词 TLRs，HBV，Loxoribine，HepG2.2.15 细胞，PBMC Study on role of Toll-like receptor 7 in hepatitis B virus infection pathogenesis Major: