Toll样受体、骨桥蛋白在肿瘤细胞中表达及功能的研究-细胞生物学专业论文.docxVIP

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Toll样受体、骨桥蛋白在肿瘤细胞中表达及功能的研究-细胞生物学专业论文

独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果,也不包含为获得 (注:如没有其他需要特别声明的,本 栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 导师签字: 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本学位论文作者完全了解 学校 有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权 学校 可 以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签字: 签字日期:2010 年 月 日 签字日期:2010 年 月 日 目 录 中文摘要I Abstract III 综 述 1 第一章 TLRs 及 OPN 在卵巢癌细胞中的表达 17 1. 材料与方法 17 2. 结果 21 3 本章小结 23 第二章 TLR4 信号对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭活力的影响 24 1. 材料与方法 24 2. 结果 26 3. 本章小结 34 第三章 TLR4 信号对 OPN 表达的影响 35 1. 材料与方法 35 2. 结果 37 3. 本章小结 40 第四章 OPN 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭活力的影响 41 1. 材料与方法 41 2. 结果 41 3. 本章小结 44 讨 论 45 总 结 48 参考文献 49 附录 1 主要仪器设备和常用试剂的配制 60 附录 2 英文缩写词 63 致 谢 66 攻读硕士学位期间发表的文章 65 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 Toll 样受体、骨桥蛋白在肿瘤细胞中表达及功能的研究 中文摘要 炎症被认为是导致肿瘤发生和发展的重要因素之一,研究证明长期存在于局部的炎症 通过 DNA 损伤、抵抗凋亡等机制诱导肿瘤的发生,并能够进一步募集大量免疫细胞侵润, 从而形成肿瘤微环境继续促进肿瘤发展,但目前对于引发炎症导致肿瘤发生和发展的相关 机制还存在许多疑问。近来的研究表明表达于肿瘤细胞中的 Toll 样受体(Toll-like receptors, TLRs)可能是炎症与肿瘤之间的一个关键连接点。 Toll 样受体是在进化上十分保守的一类跨膜受体,主要表达于免疫相关细胞及上皮细 胞,通过识别病原相关模式分子(Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs),在机体 先天免疫应答、组织修复及组织损伤引发炎症反应等过程中发挥着至关重要的作用。最初, TLRs 被认为只表达于免疫相关细胞及上皮细胞,参与活化天然免疫应答和特异性免疫应 答。近年来很多的研究发现 TLRs 稳定表达于多种肿瘤细胞表面,可能通过多种机制参与 了肿瘤的发生及发展。目前大量的研究只关注 TLRs 与肿瘤形成的关系,然而亦有研究指 出 TLRs 启动的炎症反应还参与形成肿瘤微环境,与肿瘤部位的免疫细胞浸润、良性肿瘤 细胞恶性转化和转移等过程密切相关。 骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种磷酸化的糖蛋白,能够与转移相关细胞表面的 整联素受体 αvβv 和 CD44v 受体结合,介导恶性肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭。骨桥蛋白基 因经过选择性剪接,产生 N 端存在差异的三种剪接突变体,分别命名为 OPN-a,OPN-b 和 OPN-c。其中 OPN-a 是未发生选择性剪接产生的全长 OPN,亚型 OPN-b 缺少外显子 5, OPN-c 缺少外显子 4。随着研究的深入,发现 OPN-c 在多种恶性肿瘤细胞及组织中高水平 表达,相比 OPN-a、OPN-b,与恶性肿瘤的表型形成及转移的关系更为密切,并认为 OPN-c 可作为多种恶性肿瘤的诊断标志。然而,起始 OPN 表达介导肿瘤转移的上游分子机制尚 不十分清楚,有待作进一步的研究。 Toll 样受体信号引发炎症是调控肿瘤发生、演进的一个上游分子事件,OPN 则作为一 个发挥具体作用的功能分子介导肿瘤细胞转移。那么,TLRs 信号与 OPN 两者之间是否存 在一定的联系,TLRs 能否影响 OPN 表达水平进而作用于肿瘤转移呢?在以上研究背景和 假设的基础上,我们在本课题中选取低转移卵巢癌细胞株 HO-8910 和从 HO-8910 分化而 来的高转移卵巢癌细胞株 HO-8910PM 为研究对象,首先在 mRNA 水平检测了 TLR1-TLR9 在

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