Toll样受体9信号通路在肝脏缺血再灌注后肝癌肝内转移和生长中的作用及机制研究-外科学(肝胆外科)专业论文.docxVIP

军医进修学院博士学位论文 军医进修学院博士学位论文 目 录 缩略词表 1 中文摘要 2 ABSTRACT 4 前 言 6 第一部分 缺血再灌注对肝癌肝内转移生长的影响研究 8 材料与方法 8 结 果 13 讨 论 18 结 论 19 第二部分 TOLL样受体 9 信号通路在缺血再灌注后肿瘤转移生长的作用 20 材料和方法 20 结 果 32 讨 论 44 结 论 49 全文总结 50 参考文献 51 综 述 56 参考文献 64 攻读学位期间发表文章情况 72 致 谢 73 PAGE PAGE 10 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 I/R Ischemia reperfusion 缺血再灌注 TLRs Toll-like receptors Toll 样受体 TLR9 Toll-like receptor 9 Toll 样受体 9 ICpG Inhibitory CpG sequence 抑制 CpG 序列 ODN oligodeoxy-nucleotide 寡聚脱氧核苷酸 MyD88 Myeloid differentiation Protein 88 髓样分化蛋白 88 HCC Hepatocellular carcinoma 肝细胞癌 ALT Alanine Aminotransferase 丙氨酸转氨酶 TNF-α Tumor necrosis factor α 肿瘤坏死因子 α RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链式 反应 EMSA electrophoretic gel mobility shift assay 凝胶迁移或电泳迁 移率实验 ICAM-1 Inter-Cellular Adhesion Molecule 1 细胞间粘附分子-1 NF-κB Nuclear Factor-KappaB 核因子-κB HRA hepatic replacement area 肝组织被替代区域 HE hematoxylin-eosin 苏木素—伊红 ROCK2 Rho-associated coiled-coil-containing protein Kinase 2 Rho 相关蛋白激酶 2 HIF-1α Hypoxia-inducible factor 1, alpha subunit 缺血诱导因子 1α Toll样受体9信号通路在肝脏缺血再灌注后肝癌肝内转移和生长 中的作用及机制研究 中文摘要 很多实验报道缺血再灌注能够促进结肠癌和肝癌的肝内转移和生长。缺血 再灌注会导致炎症细胞因子和粘附分子的生成，这些因子在肿瘤的粘附和转移 中起重要作用。TLR9 是 toll 样受体中的一种。阻断 TLR9 能够缓解缺血再灌注 损伤。那么，阻断 TLR9 信号通路是否能够通过缓解缺血再灌注，从而抑制缺血 再灌注后肿瘤的转移和生长。 目的：探讨 TLR9 这个炎症相关的受体及其信号通路在缺血再灌注损伤后 肝癌转移和生长中的作用及机制。 材料和方法： 1、建立 70%缺血再灌注模型和建立肝癌肝内转移模型。分为四组：第1 组： 假手术组；第 2 组：缺血 15min 组；第 3 组：缺血 30min 组；第 4 组：缺血 45min 组。四组都要在再灌注后注射肿瘤细胞。观察小鼠的生存时间，肿瘤大体观察， 肿瘤组织切片 HE 染色计算肿瘤肝组织被替代区域（hepatic replacement area,HRA）。 、 将 动 物 分 为 四 组 ： A 组 :Control ODN+sham; B 组 :iCpG+sham; C 组:Control ODN+I/R; D 组;iCpG+I/R；然后注射肿瘤细胞。观察小鼠的生存时 间，取 14 天肿瘤大体标本观察，肿瘤组织切片 HE 染色计算肿瘤的肝组织被替 代区域（HRA）。术后 2h 处死，行 PCR 检测 E-selectin、ICAM-1、HIF-1α、ROCK-2 的 mRNA 水平，用 EMSA 法检测 NF-κB 的活性，血清用生化法检测 ALT。取术后 24h 标本，检测蛋白 TLR9，MyD88，E-selectin 和 ICAM-1 的表达，取血清用 ELISA 法检测 sICAM-1、TNF-α。 结果： 1. 缺血再灌注 30min、45min 组较假手术组肝脏肿瘤 HRA 增加，小鼠的 生存时间缩短，同时 ALT 升高。 2. 缺血再灌注增加肿瘤的 HRA，缩短荷瘤小鼠生存时间，而 iCpG 能够减 缓肿瘤的 HRA，延长其生存时间。iCpG 能够抑制 I/R 后的 ALT 的水平。 .缺血再灌注能够促使 E-selectin mRNA