流式细胞术检测CD55CD59对阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断价值探讨.docVIP

流式细胞术检测CD55CD59对阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断价值探讨 　　[摘要] 目的 探讨患者外周血细胞膜上CD55和CD59缺陷对阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）的诊断价值。 方法 采用流式细胞术对CD55-PE及CD59-FITC标记的患者外周血中性粒细胞和红细胞进行检测。对2009年1月～2012年3月来我院就诊的13例PNH患者、13例再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）、21例骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）患者、12例缺铁性贫血（irondeficient anemia，IDA）患者与同期80例健康体检者进行回顾性分析。 结果 PNH患者中性粒细胞及红细胞膜表面CD55、CD59较AA、MDS、IDA及健康体检者均明显下降，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 利用流式细胞术检测贫血患者外周血红细胞及中性粒细胞膜上CD55和CD59缺陷，是临床鉴别诊断PNH与AA、IDA、MDS可靠而敏感的指标。 　　[关键词] 流式细胞术；CD55；CD59；阵发性睡眠性血红蛋白尿 　　[中图分类号] R446.11 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）29-0079-02 　　阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是获得性细胞膜缺陷引起的一种溶血性贫血，与再障关系密切，可相互转变。发病时可表现为贫血、血红蛋白尿、感染及血栓形成[1]。近年来，流式技术日渐成熟，利用流式细胞术检测患者外周血中红细胞与粒细胞表面CD55和CD59是目前绝大多数实验室诊断PNH的首选方法，较传统检测方法敏感性高且方便。本文采用流式细胞术（flow cytometre，FCM）对于59例贫血患者的外周血细胞CD55、CD59缺失率进行检测，报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　对2009年1月～2012年3月来本院及一附医就诊的贫血患者共59例进行回顾性分析，其中PNH患者（A组）13例，男9例，女4例，平均年龄（48.3±11.8）岁；MDS患者（B组）21例，男15例，女6例，平均年龄（67.4±12.8）岁；AA患者（C组）13例，男11例，女2例，平均年龄（30.2±22.4）岁；IDA患者（D组）12例，男5例，女7例，平均年龄（44.5±20.2）岁；同期正常体检或无贫血相关疾病患者（E组）80例，男42例，女38例，平均年龄（45.2±10.5）岁。 　　1.2 PNH诊断标准 　　（1）临床表现符合PNH；（2）实验室检查：酸化血清溶血试验（Ham试验）、糖水试验、蛇毒因子溶血试验、尿潜血或尿含铁血黄素试验中凡符合下述任何一种情况，即可诊断。①二项以上阳性；②一项阳性，但须具备以下条件：（a）两次以上阳性，或一次阳性，但操作正规，有阴性对照，（b）有溶血证据，（c）能排除其他溶血，如G6PD缺乏所致溶血、自身免疫性溶血性贫血等[2]。 　　1.3 结果判读 　　以健康体检者红细胞和粒细胞CD55、CD59表达设定阴性阈值，CD55、CD59百分率减少大于10%认定为PNH阳性，减少5%～10%为可疑阳性。 　　1.4 试验方法 　　所有病例均采用流式细胞术进行红细胞和粒细胞膜上CD55和CD59检测。流式细胞仪为BD公司FACS CantoⅡ，所有试剂均购自BD公司。 　　1.4.1 中性粒细胞荧光抗体标记 取患者及同期健康对照者肝素抗凝血各100μL，加入1×BD红细胞溶血素1 mL，15 min后溶血，弃上清，加入3 mL PBS缓冲液混匀后500 g离心5 min，弃上清，加入CD59-FITC、CD55-PE及同型对照各20 μL，避光反应30 min，加入PBS 400μL，待上机检测。 　　1.4.2 红细胞荧光抗体标记 取患者及同期健康对照者肝素抗凝血各20 μL，加入2 mL PBS缓冲液混匀，各取20 μL加入BD专用流式管中，分别加入CD59-FITC、CD55-PE及同型对照各20 μL，避光反应30 min，加入PBS 400 μL，待上机检测。 　　1.4.3 流式细胞仪校正 取标准荧光微球各数滴（BD公司提供），加1 mL PBS稀释、混匀，上机调整电压及补偿。 　　1.5 统计学方法 　　采用SPSS13.0软件分析，组间计量资料的比较采用方差检验，以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　PNH患者中性粒细胞CD55阳性率较MDS、AA、IDA及正常对照组均明显减少，P 0.05，差异均有统计学意义；PNH患者中性粒细胞CD59阳性率较MDS、AA、IDA及正常对照组均明显减少，差异均有统计学意义（P