ZDS和LycB转入玉米优良自交系的研究-遗传学专业论文.docxVIP

摘要 类胡萝卡索类物质具布 VA 原活性，抗氧化作用，提高机体免疫和天然的染 色剂等作用， cS-胡萝卡素脱氯酶 (ZOS) 和蕃茄红素 β环化酶 (LycB) 在整个类 胡萝卡素的生物合成途径中扮演重要角色。因此，通过农杆菌介导法将 ZDS 基 因和 LycB 基因转入世界第二大粮食作物玉米中，利用转基因技术制建高维生素 A 原玉米新品种，对改善贫困地区人群的营养健康，解决维生素 A 缺乏症，提 高玉米综合利用价值等都具有重大的意义。 本试验才三要从玉米再生体系的优化及农轩菌介尊法将 ZDS、LycB 导入玉米优 良自交系的研究等方面入手，最终确定了玉米的遗传转化体系，并且经过抗性筛 选和分子检测，成功获得转基因阳性楠株。具体如下:通过比较玉米几种基因型 的幼胚形成Il型愈伤组织的情况，从 N6 、NM 、全程等培养基中，确定采用N6、 NM 两种培养基。其中，玉米自交系 7922 、238、160、9543 等巳适应这两种培 养基。另外幼脏大小在 l .3cm 左右，授粉 11小I3d 较适合玉米幼脏诱导 II 型愈伤 组织:在玉米农杆菌转化方面，确定了最优的转化条件为菌液浓度为 00酬值。ι 浸染 20 分钟，共培养 3 天， AS 浓度 lOOJ.U1l01止， Cef 浓度 400m g/L， Kan 浓度 40mgILo 通过 Kan 滋步筛选得到川 7 株抗性菌，移载成活 64 株，一部分进行分 子检测，有 18 株 PCR 阳性苗，初步证明目的基因己整合到玉米的基因组中。 关键词z 类胡萝卡素 ;ZDS; LycB; 农杆商介导法:玉米 ABSTRACT Carotenoids have VA original activity and play a si伊ificant role in antioxidation 、 enhancing immune function and natural staining agent. While ?-carotene dehydrogenase and Lycopene ?-cyclase play an impo阳nt part in carotenoid biosynthetic pathway. Therefore，ZDS and LycB can be introduced into maize，the 气 third largest food crops in the world ，by Agrobacterium-mediated transformation. And new maize varieties of high-vitamin A can be created by transgenic technology，which is of great significance in improving the nutritional health of people in poor areas， solving the problem ofvitamin A deficiency and a better use ofmaize. In this study，we established the genetic transformation systems of maize through optimizing the regeneration systems of maize and transferring desired genes into elite maize inbred lines using an Agrobacterium mediated method. And we successfully obtained the positive transgenic plants by resistance screening and molecular detection. Procedures are as follows: First ，the high e旺icient expression vector is identified. Second，we compared the type 11 callus formations of several genotypes of maize immature embryos，then we adopted N6 and NM callus induction media. The maize inbred