‘岱玉杏’抗寒基因AmEBP1转化试验研究-林木遗传育种专业论文.docxVIP

山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 ‘岱玉杏’抗寒基因 ‘岱玉杏’抗寒基因 AmEBP1 转化试验研究 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 2 ‘岱玉杏’抗寒基因 AmEBP1 转化试验研究 中文摘要 杏( Ar meni aca vul gar i s Lam. ) 系蔷薇科( Rosaceac) 杏属植物。杏原产于我国，种 质资源极为丰富, 是中国栽培历史最久的果树之一。但由于春季低温和晚霜，常使花芽、 花，甚至幼果受冻，产量和经济效益受到极大的损失，因此选育抗寒性强的品种有重要 意义。近十几年来，国内外迅速发展的转基因技术已经在育种中得到了广泛的应用，并 且已经取得了长足发展，转基因技术已经成为改良品种最有前途的技术方法之一。花粉 管导入法在农作物上取得了令人鼓舞的成绩，但是在果树上应用的研究却极少，由于果 树育种周期长，不断地摸索试验快速有效的育种方法是很有意义的。本研究对杏进行了 抗寒基因转化试验研究，并成功将沙冬青抗寒基因 AmEBP1 通过花粉管成功转化入岱玉 杏 T0 代中，并对组培苗进行生理指标测定，其主要研究内容如下： 1.岱玉杏×凯特杏杂交亲和，坐果率达到 57%，果实横径、纵经、侧径可达 4.081cm， 4.403cm，4.412cm，均高于自然授粉的岱玉杏，表现出现杂种优势。不同处理导入 DNA 对转化率有一定影响，切除 1/2 柱头滴注外源 DNA 能提高转化率，但对坐果率有一定 影响；花粉基因处理的坐果率较正常花粉坐果率下降 9.5%； 2.采用不同浓度 DNA 导入对转化率有一定的影响，当 DNA 浓度分别为 200μg/mL、 500μg/mL、800μg/mL 时，坐果率分别为 21.5%、26.4%、12.7%，坐果率没有随着外源 DNA 浓度高低而逐渐升高或降低，而是以 500μg/mL 的浓度相对比较高，3 个 DNA 浓 度处理的坐果率远低于对照；导入 DNA 浓度在 500μg/mL 时，切除花柱 1/2 时转基因成 功率最高，在第 7 天时能达到 75%，60 天后为 30%，但基因导入后随时间的延长，阳 性比率仍然出现下降的趋势，说明基因丢失仍然存在。 3.采用改良的 WPM 培养基，对岱玉杏不同胚发育时期培养结果得出，在改良 WPM 培养基上，PF 值高于 0.3 时才能形成愈伤，附加激素 BA 在 0.6 mg/mL-0.8 mg/mL 时， 愈伤诱导率最高，在 PF=0.7 时成苗率最高；成熟胚在 MS 和改良 WPM 上均能萌动，但 有叶小、卷曲、畸形、或玻璃化，根芽生长不良的情况出现。 4.在对岱玉杏，大果杏，凯特杏，金太阳 4 个品种成熟胚培养结果表明，低温处理的 时间和 4 个品种杏的萌发呈现正相关，随着低温处理时间的延长，4 个品种杏的萌动迹 象越发明显，成苗率都有提升。大果杏在处理 60 天后，大田出苗率基本可以达到 100 ﹪，是最易成苗的品种。岱玉杏无论种胚腐烂率很高，在 60﹪以上。 5. 本研究得到岱玉杏转基因苗木。16 株经过 PCR 检测阳性，Sout her n 杂交检测有 11 个分别出现 1-3 条杂交带，另一个转基因植株中只出现了微弱的杂交带，证明 AmEBP1 基因已经整合到 T0 代组培苗中。 6.通过对转基因株系与未转基因株系组培苗抗寒生理对比，转基因株系（组培苗）LT50 为-4.37℃ ＜对照-4.12℃；SOD、POD 活性与可溶性蛋白含量在-5℃到-10℃之前达到最 大值，总体均有先升后降的趋势，并有转基因高于对照组的；游离脯氨酸含量总体上均 呈现“上升”的趋势；随着温度的降低 MDA 含量增加，-5℃之后转基因植株增幅速率 明显低于对照。 7. 试验饲喂转基因杏果后，鸡群与羊群没有明显病症，测量血常规得出对照组与转 基因组血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白量、红细胞压积、淋巴细胞比率，其指标 值均无显著差异(P0.05)，并未对动物造成病害。 关键词：抗寒基因；岱玉杏；花粉管通道；转基因；胚培养；分子检测； Study On Genetic Transformation of Cold Resistance Gene AmEBP1 into ‘Daiyu’ Apricot Abstract Apricot department rosaceae apricot genus, Apricot is one own fruit trees of China, it distributing east-north of our country. Because of poignant chance of the temperature in early