注射用丹红对实验性心肌缺血损伤保护作用.docVIP

注射用丹红对实验性心肌缺血损伤保护作用 　　摘 要：目的：研究注射用丹红对心肌缺血损伤的保护作用；方法：采用夹闭气管造成小鼠心肌缺氧模型，观察注射用丹红对气管夹闭小鼠心电持续时间的影响；在大鼠颈总动脉－颈外静脉旁路模型上，观察注射用丹红对血栓形成的影响；在体外实验观察注射用丹红对ADP诱导的血小板聚集的影响；结果：注射用丹红可明显延长夹闭气管后小鼠心电消失的时间；在大鼠颈总动脉－颈外静脉旁路模型上，注射用丹红可明显减轻血栓的湿重和干重，从而抑制血栓形成；注射用丹红可显著抑制ADP诱导的血小板聚集反应。结论 注射用丹红具有良好的抗心肌缺血作用，其作用可能与抑制血栓形成和血小板聚集等有关。 　　关键词:注射用丹红；心肌缺血；血栓形成；血小板聚集 　　 　　心肌缺血引起的心血管疾病是当前死亡率最高的疾病之一。我国传统中药对缺血心肌的保护作用的研究已日益受到重视，注射用丹红是由丹参和红花主要药效成分组成的，具有活血化瘀，通络止痛的作用。我们采用小鼠气管夹闭心肌缺氧模型和大鼠颈总动脉－颈外静脉旁路模型，观察注射用丹红对心肌缺血的保护；同时在体外血小板聚集实验中观察注射用丹红对ADP诱导的血小板聚集的影响。 　　 　　1.材料和方法 　　 　　1.1实验动物昆明种小白鼠，体重18～22g,♀♂各半；SD大鼠，体重200 ～ 260g，♀♂各半,均由安徽医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：皖医实动准第01号，实验室饲养温度：22±2℃；家兔（体重2.0 ～ 2.4 kg）安徽医科大学实验动物中心提供。 　　1.2药品与试剂 　　注射用丹红：合肥紫竹医药科技有限公司提供，冻干粉针，规格：20g生药/支，用前用生理盐水（NS）配制成所需浓度；丹参注射液：由正大青春宝药业有限公司生产，批号：国药准字每支10ml（相当于原药材15g）。 　　1.3仪器 　　751紫外分光光度计：上海分析仪器厂产品；心电图机：上海光电医用电子仪器有限公司产品；TGL-16H高速离心机：珠海黑马医学仪器有限公司产品。 　　1.4方法 　　1.4.1 气管夹闭致小鼠心肌缺氧模型[1,2] 　　昆明种小鼠50只，随机分成生理盐水（NS）对照组、注射用丹红3个剂量组（12，6，3 g生药?kg-1）、丹参注射液组（6 g生药?kg-1），每组10只，♀♂各半。小鼠尾静脉注射（iv）给予受试药物后腹腔注射3%水合氯醛（300mg/kg）麻醉，背位固定于蛙板上，做颈部正中切口，分离气管。给予受试药物后20min夹闭气管，同时开始计时，以Ⅱ导联心电持续出现一平直线（即心电消失）作为小鼠心脏停搏的标志。记录小鼠夹闭气管后Ⅱ导联心电持续的时间（min）。 　　1.4.2 大鼠颈总动脉-静脉旁路血栓的形成[3,4] 　　50只大鼠随机分成NS对照组、注射用丹红（6，3，1.5 g生药?kg-1）3个剂量组、丹参注射液（3 g生药?kg-1）阳性对照组，共5组，♀♂各半。腹腔注射10%水合氯醛（0.3ml?100g-1）麻醉后，颈部正中切口，分离左颈总动脉和右颈外静脉。在一长15cm、内径为1mm的聚乙烯管中置入一根长约5cm的已称重丝线，以50 U?ml-1肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管。将该聚乙烯管一端插入右颈外静脉，另一端插入左颈总动脉，打开动脉夹，血液自左颈总动脉流入右颈外静脉，开放血流15min后中断血流，迅速取出聚乙烯管内附血栓的丝线称重，然后放入85 oC烤箱中烤至恒重后称重，减去丝线重量分别得血栓的湿重和干重。各组开放血流前20min分别iv NS或相应的药物。 　　1.4.3 血小板聚集测定[5] 　　家兔1.8-2.5 kg,雌雄各半, 颈总动脉插管放血，柠檬酸钠（34 g?L-1,9:1）抗凝,离心(1000 rpm, 5min)后,分离富血小板血浆(PRP),再离心(3000 rpm, 15min) 分离贫血小板血浆(PPP)。计数PRP中血小板，用PPP调其血小板在40万?μl-1左右后，再用PPP调PRP在600 nm处的吸光度为0.3-0.5之间。在2 ml该PRP中加入受试药和ADP（3 umol?L-1）按Born比浊法测2、5 min 血小板聚集率。 　　血小板聚集率=（用ADP前吸光度-用ADP后吸光度）/用ADP前吸光度 　　1.5统计学处理： 　　实验结果以x±s表示，组间比较采用t检验。 　　 　　2.结果 　　 　　2.1注射用丹红对气管夹闭小鼠心电持续时间的影响 　　结果如表1所示，气管夹闭后，NS对照组小鼠在5.88±1.49min时相继死亡，而注射用丹红12，6，3 g生药?kg-1 3个剂量组小鼠心电消失的时间较NS对照组显著延长，最多可延长约86.9%，差