不同温度控制条件下兔VX2肝肿瘤射频消融后不同区域细胞凋亡和增殖的实验分析-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 英文缩写略语 英文缩写 英文全名 中文全名 RFA Radiofrequency ablation 射频消融 Tunel TdT-Mediaed dUTP nick end labeling 末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记测定法 PCNA Proliferating Cell Nuclear Antigen 增殖细胞核抗原 PCNA Primary hepatic carcinoma 原发性肝癌 HBC Hepatic metastatic carcinoma 转移性肝癌 HE Hematoxylin and eosin staining 苏木精-伊红染色 PBS Phosphate buffered solmion 磷酸盐缓冲溶液 PEI Percutaneous ethanol injection 经皮穿刺无水酒精注射 TACE Transhepatic arterial chemoembolization 经肝动脉化疗栓塞术 ANOVA Analysis of variance 方差分析 AI apoptotic index 凋亡指数 PI proliferation indix 增殖指数 不同温度控制条件下兔 VX2 肝肿瘤射频消融后不同区 域细胞凋亡和增殖的实验研究 中文摘要 研究背景及目的 目前射频消融已成为肝脏原发性和转移性肝癌有效治疗方法之 一。射频消融治疗主要是利用高频交流电流（350-500KHz）使细胞组织内离子产 生震荡摩擦生热，导致细胞损伤坏死。当温度超过 60℃会使细胞内蛋白质和脂质 双分子层变性，从而导致细胞不可逆性死亡。当在较低温度下（50℃～55℃），射 频治疗 4～6d 可造成细胞不可逆的损伤。因此有必要对不同温度控制条件下肝癌 射频消融后残瘤细胞活性变化规律进一步研究。 本实验通过对不同温度控制条件下射频消融兔肝 VX2 肿瘤后靶区内肿瘤细胞 凋亡、增殖变化情况，探讨不同温控条件下射频消融对恶性肿瘤组织细胞活性的 影响情况，为肝恶性肿瘤射频消融治疗提供实验依据。 材料与方法 对健康新西兰大白兔行开腹肝左叶种植VX2瘤株，建立兔VX2肝肿瘤模 型。对照组6只，实验组72只，在兔接种VX2瘤株14d后行肝脏CT平扫及双期增强扫 描，以确定VX2瘤株接种是否成功。3 w后肿瘤直径约2.0～2.5 cm,将对照组6只处 死，取肝内肿瘤组织行病理检查。实验组中分为三组(n=24)。每组皆在开腹下行 射频消融术。第一组条件：射频针温度50℃～70℃，射频电压48 v，治疗时间15 min。 第二组条件：射频针温度70℃～90℃，射频电压48 v，治疗时间15 min。第三组 条件：射频针温度90℃～110℃，射频电压48v，治疗时间15min。术后即刻、1 d、 3 d、1 w、2 w、3 w,共6个时间段处死（n＝6）。将残瘤大体标本分为：针道炭化 区、热凝固区、充血出血区（消融边界区），三区标本分别置入10%福尔马林浸泡， 然后脱水、烘干、石蜡包埋，行HE染色、tunel、PCNA免疫组化检测。术中观察腹 腔内、肺转移情况。分析瘤体经过不同温度RFA治疗后，不同区带内肿瘤细胞活性 变化特点。 PAGE PAGE 4 结果 1. 本组实验中 78 只新西兰兔，肝内接种成功 77 只（成瘤率 98.7%），肿瘤病灶直 径约 2.0～2.5 cm；2 只分别在种植后第 7、10 d 死亡，发现腹腔转移灶 2 只。接 种未成功的和死亡的予以补种。 2． HE 染色：针道碳化区：三组标本（50℃～110℃）光镜下见大量肿瘤细胞结构 消失，胞核固缩、核碎裂、部分肿瘤细胞溶解液化。热凝固区：（1）50℃～70℃ 组：1 w 后见较多存活的肿瘤细胞和炎性细胞；3 w 后见到大量存活的肿瘤细胞。 （2）第二、三组（70℃～110℃）：1～3 d 后见到大量凝固坏死细胞和少量坏死细 胞；1 w 后，热凝固区逐渐变成白色并与周围区域分界欠清，炎性细胞浸润明显； 3 w 后可见部分存活肿瘤细胞。充血出血区：（1）50℃～70℃组：2 w 后见交界区 内较多的肿瘤细胞，其形态及分布较规则，细胞轻度水肿,肝窦间隙见大量红细胞； 3 w 后可见大量肿瘤细胞。（2）第二、三组（70℃～110℃）：2 w 后见少许肿瘤细 胞存在并见少量纤维增生；3 w 后可见较多肿瘤细胞。 3. RFA术后兔VX2肝肿瘤凋亡的TUNEL法检测结果：（1）50℃～70℃组凋亡指数（AI）： 针道区为0.22±0.19，热消融区为0.38±0.17，交界区为0.39±0.11；(2)70℃～ 90℃组AI：针道区为0.28±0.09，热消融区为0.54±0.0