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戴氏虫草活性成分分析及其对小鼠免疫功能影响 　　摘要：分别采用苯酚硫酸法、高效液相色谱法（HPLC）测定了野生戴氏虫草的多糖、腺苷、甘露醇的含量；利用NIH小鼠进行碳廓清试验、免疫器官重量和迟发型超敏反应试验，通过急性毒性试验确定戴氏虫草水提液小鼠LD??50。试验结果表明，野生戴氏虫草的多糖、腺苷及甘露醇含量分别为36.20 mg/g、??0.27 mg/g和??80.20 mg/g；戴氏虫草水提液能提高非特异性免疫功能，提高受环磷酰胺抑制的小鼠免疫器官重量和细胞免疫功能，其小鼠经口LD??5069.42 g/kg。?? 　　关键词：戴氏虫草；?A多糖；?A腺苷；?A甘露醇；?A碳廓清；?A细胞免疫功能?? 　　S567.35??A 　　 　　冬虫夏草［Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.］是我国传统的名贵中药材，具有独特的药用价值和广泛的药理作用，深受大众青睐，但由于野生资源极为有限，加上过度采挖，导致冬虫夏草产量逐年下降，价格极其昂贵。在虫草属中不同的虫草种类往往具有相似的化学成分和药理作用［1］，因此，寻找其它虫草资源作为冬虫夏草的替代品是缓解冬虫夏草资源压力的一条有效途径。戴氏虫草（C. taii Liang et Liu）于1991年在我国贵州首次被发现和报道［2］，随后相继在安徽、河南、湖南、广东等地均有发现。对戴氏虫草和冬虫夏草化学成分的研究表明，两者的氨基酸、维生素和微量元素等含量基本一致［3］，对戴氏虫草菌丝体的微量元素及氨基酸成分也有研究和报道［4，5］，药理研究发现其菌丝体提取物具有抗菌［6］、免疫调节［6~9］、抑制肿瘤细胞［10］等作用。本研究对野生戴氏虫草的主要活性物质进行分析，并与青海产冬虫夏草进行比较，同时研究其对小鼠非特异性免疫功能、免疫器官和细胞免疫功能的作用，为开发利用野生戴氏虫草提供依据。?? 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1?Σ牧? 　　戴氏虫草由广东金虫草生物开发有限公司提供，冬虫夏草购自广州同仁堂药房。?? 　　1.2?κ约? 　　葡萄糖、甘露醇由中国药品生物制品检定所提供；苯酚由北京鼎国生物技术有限责任公司提供；浓硫酸为广州化学试剂厂产品；腺苷为美国Sigma公司产品；环磷酰胺（CP）为上海华联制药有限公司产品；2，4-二硝基氯苯（dinitrochloro??benzene，DNCB）为东京化成工业株式会社产品；印度墨水为德国Chroma公司产品。?? 　　1.3?σ瞧? 　　日本岛津LC-20A高效液相色谱仪：配SPD-M20A二极管阵列检测器、RID-10A示差检测器、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱。瑞士产R200旋转真空干燥仪。755B型紫外可见分光光度计和FA2004N电子天平由上海精密科学仪器有限公司生产。?? 　　1.4?κ笛槎?物 　　NIH小鼠，雌雄兼用，体重18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2003-0002、粤监证字2004A018。?? 　　1.5??活性成分的测定 　　1.5.1?Χ嗵呛?量的测定 　　称取烘干粉碎的戴氏虫草和冬虫夏草各10 g置于500 mL的圆底烧瓶中，加250 mL双蒸水，在恒温电热套上（80 ℃）浸提2 h后过滤，滤渣中再加入250 mL双蒸水提取2 h，过滤后合并滤液，减压浓缩后定容至100 mL，加入4倍体积的95%乙醇，静置过夜，离心弃上清液，沉淀用水定容至??100 mL，采用苯酚硫酸法测定多糖含量［11］。?? 　　钟 韩，等：戴氏虫草活性成分分析及其对小鼠免疫功能的影响 　　1.5.2?ο佘盏牟舛ǎ?12］ 　　称取烘干粉碎的戴氏虫草和冬虫夏草各??0.25 g于25 mL容量瓶中，用50%乙醇溶液定容，置超声波振荡器中振荡提取30 min，取上清液用??0.45 μm滤膜过滤，滤液上HPLC分析。色谱条件为色谱柱：Shim pack-VP ODS（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈/水 = 7/93（V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：260 nm。?? 　　1.5.3?Ω事洞嫉牟舛ǎ?13］ 　　称取烘干粉碎的戴氏虫草和冬虫夏草各??2.0 g于50 mL离心管中，加入50%乙醇溶液??30 mL，于超声波振荡器中超声30 min后，4355 ×g离心??5 min，取上清液，残渣重复提取一次，合并上清液，浓缩后定容至25 mL，用0.45 μm滤膜过滤，滤液上HPLC分析。色谱条件为色谱柱：Shim pack-VP NH2（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈/水 = 4/1（V/V）；流速：??2.0 mL/min