重金属对hela细胞中热激蛋白70hsp70表达的影响-effect of heavy metals on expression of heat shock protein 70 hsp 70 in hela cells.docxVIP

PAGE PAGE IV hazard to HeLa cells. As the concentration of Cd2+ increased, the amount of HSP70 also increased, and were significantly expressed(P0.01). Exposure HeLa cells to Zn2＋and Cu2+ respectively induced significant elevations of HSP70 in HeLa cells, the expression of HSP70 was positively correlated with the concentration of Zn2＋and Cu2+. The result shows that the degree of influence of the metal to HSP70 is Cd2+ Zn2＋Cu2＋. Through the three research methods above, to establish a more effective detection method of the expression of HSPs for future experimental study. Key words: HeLa cells, HSP70, heavy metals, IFS, Western blotting, RT-PCR. 目录 1 文 献 综 述 1 1.1 热激蛋白 1 1.1.1 热激蛋白的发现 1 1.1.2 热激蛋白的分类 1 1.1.3 热激蛋白的特点 1 1.1.4 热激蛋白的功能 1 作为分子伴侣维持细胞自稳 1 结合功能 2 参与细胞对应激原的耐受性 2 增强抗氧化作用 2 压力下的上调 2 管家作用 2 1.1.5 热激蛋白的应用 2 癌症疫苗佐剂 2 抗癌疗法 3 农业上的应用 3 1.2 热激蛋白 70 3 1.2.1 热激蛋白 70 分类 3 1.2.2 热激蛋白 70 及其基因的结构特征 3 1.2.3 热休克蛋白 70 的主要功能 4 “分子伴侣”功能 4 HSP70“细胞温度计” 4 细胞保护作用 4 1.2.4 热激蛋白 70 与环境监测 5 1.2.5 热激蛋白 70 与重金属 5 1.2.6 热激蛋白 70 与生物医学 5 DNA 疫苗 5 治疗遗传病 5 肿瘤免疫 5 2 引 言 7 2.1 研究的目的及意义 7 2.2 主要研究内容 7 2.2.1 HSP70 基因转录水平的研究 7 2.2.2 HSP70 蛋白表达水平的研究 7 2.2.3 HSP70 蛋白表达水平的研究 7 2.3 技术路线 8 3 材料与方法 9 3.1 实验材料 9 3.2 仪器与试剂 9 3.2.1 主要实验仪器 9 3.2.2 主要试剂 9 3.2.3 常用溶液的配置 10 3.3 实验方法 12 HeLa 细胞的培养 12 HeLa 细胞的原代培养 12 HeLa 细胞的继代培养 12 3.3.2 重金属诱导 HeLa 细胞 12 RT-PCR 13 总 RNA 的提取 13 RNA 的检测 13 DNase 处理 13 cDNA 的合成 14 PCR 14 琼脂糖凝胶电泳检测 15 Western blotting 15 样品处理 15 Western blotting 分析 16 免疫荧光染色（Immunofluoresence staining，IFS） 16 标本制作 16 4 结 果 18 4.1 重金属诱导后细胞形态观察 18 HYPERLINK \l _TOC_250006 4.2 总 RNA 浓度的测定 18 HYPERLINK \l _TOC_250005 4.3 HSP70 基因转录水平的研究 18 HYPERLINK \l _TOC_250004 4.4 Western blotting 检测 19 HYPERLINK \l _TOC_250003 4.5 免疫荧光染色（IFS）检测 20 5 讨 论 24 HYPERLINK \l _TOC_250002 5.1 HeLa 细胞的培养 24 5.2 重金属处理 24 HYPERLINK \l _TOC_250001 RT-PCR 24 HYPERLINK \l _TOC_250000 Western blotting 24 5.5 免疫荧光染色 25 6 结