微柱凝胶法在不规则抗体特异性鉴定中应用.docVIP

微柱凝胶法在不规则抗体特异性鉴定中应用 　　【摘要】 目的：探讨微柱凝胶法在血型不规则抗体特异性鉴定中的应用。方法：分别用盐水法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法对笔者所在医院64例不规则抗体阳性患者进行抗体特异性鉴定。结果：盐水法检出2例抗体，抗人球蛋白法检出55例抗体，微柱凝胶法检出62例抗体。其中Rh系统抗体24例，MNSs系统11例，Lewis系统9例，Diego系统2例，抗-E联合抗-Mur 1例，未确认抗体特异性17例。结论：微柱凝胶法应用于不规则抗体特异性鉴定敏感性高、特异性强，操作简便、快捷，结果判读清晰易于标准化。 　　【关键词】 微柱凝胶法； 抗人球蛋白法； 不规则抗体； 抗体特异性 　　不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体，在临床上易引起输血不良反应、新生儿溶血病、血型鉴定及交叉配血困难等。输血前对受血者进行血型不规则抗体筛选、特异性鉴定及交叉配血试验，是确保临床输血安全和有效的重要措施。笔者所在医院采用盐水法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法对拟输血和手术的患者进行血型不规则抗体筛选，对结果阳性者再进行抗体特异性鉴定，为患者选择相应抗原阴性及交叉配血试验相合的血液进行输注，保证了临床输血治疗的安全性和有效性。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 选自笔者所在医院2012年10月-2014年2月住院申请输血和手术备血的7596例患者筛查出的不规则抗体阳性64例，年龄26～85岁，男16例，女48例，有输血史或妊娠史者52例，无输血史或妊娠史者12例。 　　1.2 方法 　　1.2.1 仪器与试剂 全自动血型与配血分析系统（强生公司）；Diana微柱凝胶抗球蛋白卡、低离子介质溶液、专用孵育器、离心机（西班牙黛安娜公司）；KA-2200离心机（日本九保田公司）；上海产的电热恒温水浴箱。抗人球蛋白试剂、抗体筛选细胞、谱细胞、抗M抗体、抗P1抗体、抗C抗体、抗c抗体、抗D抗体、抗E抗体、抗e抗体、2-Me试剂（上海血液生物医药有限责任公司）；试剂均批检合格并在有效期内使用。 　　1.2.2 不规则抗体的筛查 取患者EDTA二钾盐抗凝血标本4 mL，未抗凝标本4 mL，3000 r/min离心5 min后，采用盐水介质（室温、4 ℃、37 ℃）和微柱凝胶抗球蛋白法同时检测参照文献[1]，全自动分析系统检测出的阳性结果再用Diana微柱凝胶抗球蛋白卡复查。 　　1.2.3 不规则抗体特异性鉴定 　　1.2.3.1 盐水法和抗人球蛋白法 在11支试管内分别加入1至10号谱细胞及洗涤三次的2%～5%自身细胞悬液各1滴，各加入被检者血清2滴，混匀，分别置室温、4 ℃、37 ℃下离心观察并记录结果，后置37 ℃孵育1 h，用生理盐水洗涤3次，倒尽末次洗涤的盐水，吸干试管边缘的水分，于试管内加入抗人球蛋白试剂2滴，3000 r/min离心15 s，观察结果，有凝集者为阳性，无凝集者为阴性；同时用IgG抗D致敏的2%～5%的O型RhD阳性压积红细胞做阳性对照，AB血清2滴加2%～5%的O型RhD阳性压积红细胞做阴性对照。 　　1.2.3.2 微柱凝胶法 在微柱凝胶卡上标记被检者姓名及谱细胞的编号、自身细胞，用微量加样器分别加入低离子液稀释的0.8%～1%的谱细胞悬液、自身细胞悬液各50 μL，后加被检者血浆25 μL于微柱凝胶卡中，置37 ℃专用孵育器内孵育15 min，1100 r/min离心9 min，肉眼观察结果。红细胞均匀沉于管底者为阴性，悬浮于凝胶表面或凝胶中段者为阳性。根据实验结果对照标准细胞谱确定抗体的特异性。对鉴定为特异性抗体者，采用相对应的抗体试剂检测红细胞抗原是否为阴性，以确认所检抗体的准确性。 　　1.2.4 不规则抗体免疫球蛋白类别鉴定方法 采用巯基试剂（2-Me）区分IgG和IgM技术。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，检验采用配对计数资料的 字2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 3种方法对血型抗体特异性鉴定结果 64例不规则抗体阳性患者，盐水法检出特异性抗体2例，抗人球蛋白法检出55例抗体，微柱凝胶法检出62例抗体。抗人球蛋白法和微柱凝胶法两者比较差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.2 不规则抗体特异性分布 64例不规则抗体阳性患者中Rh系统抗体24例，MNSs系统11例，Lewis系统9例，Diego系统2例。抗D 3例、抗Ec 11例、抗E 9例、抗M 7例、抗 Lea 8例，抗Mur、抗Dia各2例，抗c、抗N、抗Leb、抗s各1例，抗-E联合抗-Mur 1例，未确认抗体特异性17例。 　　3 讨论 　　不规则抗体分为IgM和IgG类抗体，IgM抗体是天然产生的，IgG抗体是通过妊娠免疫、注射