猪硒蛋白vselv基因克隆及日粮硒水平对其组织mrna表达丰度的影响-cloning of porcine selenoprotein vs elv gene and effect of dietary selenium level on mrna expression abundance in pig tissues.docxVIP

\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\\:川WW Y1800HU t) 本课题由国家自然科学基金项目资助 项目编号特此表示感谢 论文独创性声明 本人郑囊声明 t 所虽交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取 得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包 含其他个人或集体巳经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学 或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。均我一同工作的同志对本研究所 做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名: 认句啡 01010 年 T 月件日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查|到和借阅，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不 同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 at7l0 年 ob月材日 dOfO 年 ob 月 ω 日 猪硝蛋白V(Sel阶基因克隆及日粮晒水平对其组织 mRNA表达丰度的影响 摘要 锢在体内主要以晒蛋白的形式发挥生理功能。迄今为止，哺乳动物中己确定的晒 蛋白基因有 25 种，但是大部分晒蛋白在体内的生理功能还不能确定。 SelV 基因是近 年来报道的…个新的晒蛋白基因，在猪上 ，SelV 基因的序列及不问晒水平日粮对其表 达调控至今未有报道，因此本实验以猪为模型在克隆猪 SelV 基因基础上，研究了缺 晒、正常和高晒日粮机体组织 SelVmRNA 丰度的变化规律。 。试验选用了 28 日龄，平均体重?公斤左右的断奶公猪 24 头，采用单因素设计， 设酵母晒添加 0，0.3， 3.伽19 Selkg 三个处理，每个处理设 8 个重复，每个重复 1 头 猪。以缺册的玉米、豆柏配制基础日粮，含础 0.03mg Selkg。试验期为16w，在试验 w ，8w，16w 清晨，前腔静脉采集试猪血样; 16w 后屠宰试猪并于肝、肾、肌肉、 视丘下郎、靠丸、心、脾、垂体和甲状腺取样。通过 RACE 技术克降了包括起始密 码子、 UGA 密码子及 3非翻译区域末端的猪 SelV 全长基因，并对不向日粮础水平下 试猪上述组织的 SelV 基因作实时定量 PCR 分析。 。 试验结果表明，克隆的猪 SelV 基因 cDNA 长度 1233 bp. 编码区长 1029坤，.编 码 342 个氨基酸，其编码的 cDNA 序列与人的序列相似度达 97%; 井且与鼠、兔、 人等氨基酸序列比对有较高的相似性。日粮添加 0.3和3.伽19 Selkg 晒组试猪血浆和 肝脏 GPX 活性显著高于低晒组 (P0.05) ，但 0.3与 3.臼ng 之间 GPX 活性无显著差异 (P0.05) ，基础日粮组试猪处于于缺础状态。通过实时定最PCR 分析显示，各础水平 都以靠丸组织 SelVmRNA 丰度最高，较其他组织高出 301000 倍(PO.Ol) ，肝脏、甲 状腺、垂体、下丘脑及肾脏 SelVmRNA 表达丰度也较高，心脏、血液白细胞及脾脏 中 SelVmRNA 表达丰度较低，肌肉组织中改基因表达丰度最低:随着日粮晒水平的 增加，肾脏 SelVmRNA 丰度一直呈下降趋势 (P0.05)。低晒日粮中(0 mg Selkg) ，、 视丘下部和肌肉组织 SelV mRNA 的表达丰度高于添加晒组 (O.3mg Selkg 和 3.0 mg Selkg) (P0.05)。在三个晒水平间，只有叩状腺的SelVmRNA 表达丰度在晒添加最为 O.3mg Selkg 时最高，且与低、高晒组间出现差异 (P0.05) ，这与其他组织不同。总之， 靠丸组织 SelV mRNA 丰度远远离于其他组织， SelV 可能在靠丸中具有重要作用: 不同晒水平对各组织中 SelV 基因调节存在较大差异。 11 11 关键词 :Sel V， 基因表达，晒蛋白，实时定囊 PC鼠，猪 Cloning of the porcine selenoprotein V gene and the effect of dietary selenium on its mRNA abundance in different tissues Abstract: Selenium s function is perfonned in the 岛rm of selenoprotein in vivo. Studies on 白e expression of selenoprotein to diet