转基因双歧杆菌治疗小鼠实验性结肠炎的机理分析-mechanism analysis of transgenic bifidobacterium in treating experimental colitis in mice.docxVIP

暨南大学硕士学位 暨南大学硕士学位 论文 转基因双歧杆菌治疗 小鼠 实验 性 结 肠 炎 的 机 理 研 究 目录 中文摘要………………………………………………………………………………………(Ⅰ) 英文摘要………………………………………………………………………………………(Ⅱ) 目录……………………………………………………………………………………………(Ⅲ) 1 前言………………………………………………………………………………………… (1) 2 材料与方法………………………………………………………………………………… (4) 3 结果………………………………………………………………………………………… (13) 4 讨论………………………………………………………………………………………… (24) 5 结论………………………………………………………………………………………… (29) 参考文献……………………………………………………………………………………… (30) 英文缩略词表………………………………………………………………………………… (36) 攻读学位期间发表的文章…………………………………………………………………… (37) 致谢…………………………………………………………………………………………… (38) IV PAGE PAGE 1 1 前 言 溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）属于炎症性肠病（inflammataory bowel disease， IBD），是一种累及直肠和结肠的慢性非特异性炎症性疾病，临床表现以腹痛、腹泻、排粘 液血便为主；病变主要累及结直肠粘膜层与粘膜下层，病理特征以粘膜慢性炎症和溃疡形 成为主；其病因仍未明确，目前研究认为与感染、免疫系统紊乱、遗传及肠道微生态失衡 等有关[1]。UC 患病率国内外均呈上升趋势，是消化系统的难治性疾病之一。大多数患者表 现为慢性复发型且与结直肠癌有密切关系，而急性暴发型患者普遍合并多种严重并发症， 其预后不良[2]。 UC 的具体发病机制尚未明确。目前多数研究发现，UC 患者体内双歧杆菌等生理性 益生菌显著减少，同时致病菌的数量明显增加，存在明显的肠道菌群失调现象[3]。肠道益 生菌群是人体抵御外来致病菌的一个重要屏障。益生菌群紊乱将导致肠内菌群迁移，而且 与 UC 疾病程度呈正相关[4]。而且研究表明，益生菌及相关制剂能通过增强屏障作用、调 节肠道粘膜免疫、分泌抗菌素及改变肠内细菌分布等作用，有效地维持肠道完整性和抑制 炎症的发展[5]。Toumi R[6, 7]等报道，通过对实验性结肠炎小鼠补给外源性的乳酸杆菌和双 歧杆菌，能抑制结肠受损区域的粘膜炎症发展且降低 NO 水平，同时有效地维持肠道粘膜 屏障作用。 细 胞 因 子 对 UC 的 发 病 机 制 有 着 重 要 的 作 用 。 IL-10 （ Cytokine interleukin-10 细胞因子白细胞介素-10）是由 CD4+Th2 辅助细胞亚群产生，也可由单核细胞及巨噬细胞 产生，是细胞免疫反应中最为重要的负性调节因子。它能在 mRNA 水平上抑制激活的单核 细胞、巨噬细胞和 T 细胞，从而发挥功效。它抑制许多促炎性细胞因子的分泌,如 IL-1、IL-5、 IL-6、TNF-α 和 IFN-γ 等,同时能抑制肥大细胞的激活以及其细胞因子的分泌, 从而参与免 疫反应的调节。有研究通过敲除小鼠 IL-10 基因来复制 UC 模型，提示 UC 的 IL-10 水平存 在不足[8]。剔除 IL-10 基因的小鼠可自发产生结肠炎，表明 IL-10 在维持正常肠道粘膜免疫 调节起着关键作用。临床试验中发现 UC 患者接受重组人 IL-10 后，疾病活动指数降低， 病人的耐受性良好[9]。目前各种针对 IL-10 的 UC 免疫治疗在动物模型和临床试验中均取得 良好的效果[10]。 目前临床和实验研究发现，血管形成在 UC 中扮演着极其重要的角色[11-13]。慢性炎症 中，新生血管通过形成功能失调的新生脉管结构以及增加炎症细胞的聚集，增强炎症反应， 最终加剧 UC 的病理发展。病理性血管形成表现为不正常的脉管结构、血管渗透性的增加、 炎症反应的加剧和较高的血栓形成可能。慢性炎症介质通过不同的机刺激血管形成[14, 15]。 PAGE PAGE 10 如中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞通过刺激诱导转录和增强 VEGF-A（Vascular endothelial growth factor，血管内皮生长因子-A）蛋白以及 NO 的表达，最终产生大量的 VEGF-A，其 中 NO 已被证实能够上调 VEGF-A 的表达[16]。一些促炎因子也从穿过