抗体药物偶联物ADC筛选和鉴定-ThermoFisherScientific.PDFVIP

抗体药物偶联物(ADC)筛选和鉴定 便捷高效的检测抗体内化的工具 抗体药物偶联物 “眼见为实”的抗体内化 过去十年来，生物制剂越来越多地被用作治疗药物。对于 抗体药物偶联物(Antibody-Drug Conjugates ，ADC) ，抗体 的内化是一种强有力的作用机制，可以使ADC从靶细胞质 膜上的结合位点转移至溶酶体的裂解环境内，从而激活与 其相连的毒素(图1)。 内化过程的效率与ADC的治疗指数直接相关。在Invitrogen™ 品牌下，我们整合了强大的pHrodo™ iFL技术、Zenon™标 记技术和SiteClick™抗体标记技术，提供便捷高效且易于 使用的研究内化的抗体标记工具。 pHrodo iFL技术 图1. 抗体药物偶联物的内化。抗体药物偶联物(ADC)由一个直接靶向 肿瘤细胞抗原的单克隆抗体结合一个小的细胞毒性分子而组成的。 pHrodo iFL试剂非常适合检测生物分子内化 ADC可特异性地结合靶细胞，并被迅速内化，一般在转运至溶酶体后 释放出药物，产生具有高度靶向性的化学治疗药物的效用。 一些荧光强度不受环境影响的荧光基团(如Invitrogen™ Alexa Fluor™染料)研究内化时需要使用淬灭剂。而pHrodo iFL染料在中性pH时不发出荧光，内化后在酸性pH环境下 可自动发出明亮的荧光(图2)，无需使用淬灭剂。 图2. 使用氨基反应性Invitrogen™ pHrodo™ iFL Red和pHrodo™ iFL Green试剂制备的赫赛汀结合物的pH应答图谱。这些结合物在细 胞外中性pH下几乎无荧光，一旦内化进入细胞后可发出明亮的荧光。 使用pHrodo iFL染料标记的生物分子在细胞外不发出荧光， pHrodo iFL抗体标记方法 因此，无需清洗和淬灭即可检测活细胞中的ADC 内吞和转 运，只有特异性内化的抗体才可以检测到荧光信号(图3) 。此 pHrodo iFL Red和Green氨基反应性染料和标记试剂盒 外，还可以用于研究内吞途径中内化抗体的位置。图4显示 pHrodo iFL产品可用于抗体赖氨酸的传统抗体标记。这些氨 了溶酶体中与GFP共定位的pHrodo iFL染料的信号。 基反应性的pHrodo iFL STP酯有绿色和红色两个版本，可 作为单独包装或微量蛋白标记试剂盒提供，后者包含标记 和纯化蛋白或抗体所需的全部产品。 图3. 仅在Her2+细胞内可以检测到赫赛汀-pHrodo iFL Red结合物 的荧光信号，显示了特异性的内化作用。使用5 nM赫赛汀-pHrodo + – iFL Red结合物37ºC处理SK-BR-3 (Her2 ) 或MDA-MB-231 (Her2 )细 胞一定的时间，在Thermo Scientific™ CellInsight™ CX5高内涵筛选 (HCA)平台上分析细胞，结合的赫赛汀不断内化至Her2+细胞内；而 图4. 使用氨基反应性的pHrodo™ iFL Red STP ester制备的赫赛汀 Her2–细胞则几乎无信号。 结合物，只有在内化至酸性细胞器内才可发出荧光。使用Invitrogen™ CellLight™ Lysosomes-GFP和NucBlu