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条斑紫菜赤腐病病原学研究 　　摘要： 　　条斑紫菜是红藻门的代表性物种之一，具有重要的经济价值。但近年来，随着条斑紫菜栽培规模的持续扩大，病害发生的频率、规模和危害程度也逐年增加。本研究对紫菜腐霉的生长特性进行研究，发现其在温度28℃，盐度为20‰时生长速度最快。此外，对感染的叶片进行了病原学的研究。对条斑紫菜病害进行病原学和致病条件的研究，不仅可以为制定病害防治措施提供依据，而且也将为抗病品系的筛选提供条件。 　　关键词： 条斑紫菜；赤腐病；紫菜腐霉 　　【分类号】：S968.4 　　一、 背景介绍 　　条斑紫菜是一些独特的海洋藻类，且易通过它们的丝状体或叶状体被辨别。主要分布于南半球和北半球寒冷的北方海岸[1，2]。条斑紫菜的人工栽培产业是世界上商业价值最重要的海藻栽培产业，其中紫菜年总产值近20亿美元，中国、韩国和日本每年紫菜栽培产业的总产值已经达到14亿美元以上[3]。近年来， 我国条斑紫菜产业发展迅猛， 栽培产量逐年增加， 居世界第一位。随着养殖规模的扩大紫菜病害每年都有不同程度的发生，这些病害对紫菜产值造成严重影响。 　　赤腐病是严重危害条斑紫菜的一种病害，1947年日本的新崎盛德首先报导了赤腐病[4，5]，1970年由高桥实等鉴定病原菌为腐霉属新种-紫菜腐霉（Pythium porphyrae）[6]。目前关于赤腐病的研究热点主要集中在抗紫菜腐霉蛋白的分离纯化[7]。 　　本实验研究赤腐病的致病机理以及发病过程，对条斑紫菜病害进行病原学和致病条件的研究，不仅可以为制定病害防治措施提供依据，而且也将为抗病品系的筛选提供条件，对高产抗病品系的筛选有着不容忽视的应用价值。 　　二、 材料与方法 　　（一） 材料来源 　　健康的条斑紫菜叶片来自于实验室自由丝状体培养而成的，叶状体培养 　　条件为：温度15℃，盐度28‰-29‰，光照强度58.1μmol/m2?s-62.5μmol/m2?s，光暗周期12L：12D，每五天换一次培养基并充气培养。 　　紫菜腐霉菌株购自于日本生物资源库。 　　（二） 紫菜腐霉的培养 　　紫菜腐霉在玉米粉琼脂固体培养基[7]上进行划线培养，温度20℃。菌丝扩大培养时，刮取-一小块经纯化的腐霉菌丝块置于谷氨酸钠液体培养基[8]中，20℃，100 r . min-1。 　　（三） 不同培养条件对紫菜腐霉菌丝体生长的影响 　　将在固体培养基上生长5天的菌丝接种到液体培养基中，置于4℃-36℃（pH=7.5，盐度为18‰，每隔4℃设一个梯度）和盐度为5‰-50‰（pH=7.5，温度为20℃，每隔5‰设一个梯度）的恒温培养箱中，每个实验组梯度设置3个平行，每组最初起始重量为1mg（湿重）。一周后测量每个实验组的菌丝体重量。 　　（四） 人工感染实验及观察 　　将在液体培养基中生长5天的菌丝体用灭菌海水冲洗三次，并用消毒的卫生纸稍微把水吸干。称取2g菌丝（湿重）置于装有200ml灭菌海水的锥形瓶中，制成终浓度为1g/100ml 的菌丝体悬液，每组锥形瓶中放入5片健康的紫菜叶片，同时设置3个重复。此外设置一组无添加菌丝的作为对照，同时设置3个重复。将对照组和实验组置于光照培养箱中，温度15℃，盐度29‰，光照强度58.1μmol/m2?s-62.5μmol/m2?s，光暗周期12L：12D。 　　将对照组和实验组患病的叶片，切取正常的和患病部位叶片组织，利用Olympus CX31型显微镜观察病斑部位并做记录。 　　三、 结果 　　（一） 不同培养条件对紫菜腐霉菌丝体生长的影响 　　由表1可知，在液体培养基中生长一周后，紫菜腐霉菌丝体在16-36℃的温度范围内生长良好，菌丝体最适生长温度为28℃，重量达到了346.6mg，其次是24℃，重量为256.9 mg。经统计学方差分析，20℃和36℃之间的菌丝体重量有显著性差异（P0.05），其余各组间均有极显著性差异（P0.01）。因此，温度对紫菜腐霉菌丝体的生长有着重要的作用。由此也可推断，养殖海区的高温是紫菜腐霉大量繁殖的一个诱发因素。图1显示的是不同的温度条件下紫菜腐霉菌丝体的日增长率。 　　表1 不同培养条件下紫菜腐霉菌丝体的生长 　　温度（℃） 菌丝重量（mg） 盐度（‰） 菌丝重量（mg） 　　4 2.9±0.28 5 35.5±0.96 　　8 6.9±0.14 10 51.1±1.83 　　12 14.3±0.31 15 80.4±1.48 　　16 31.7±0.22 20 129±1.17 　　20 127.1±0.20 25 92.4±1.89 　　24 256.9±0.25 30 75.3±2.68 　　28 346.6±1.10 35 71.8±1.39 　　32 242