桃红四物汤对药物致不完全流产早孕大鼠血管生成及Ang―1,Ang―2,Tie―2表达影响.docVIP

桃红四物汤对药物致不完全流产早孕大鼠血管生成及Ang―1,Ang―2,Tie―2表达影响 　　[摘要] 目的：观察桃红四物汤对药物致早孕大鼠不完全流产模型的大鼠子宫微血管密度，血清中促血管生成素1（Ang-1）和促血管生成素2（Ang-2）含量及子宫组织中酪氨酸激酶受体（Tie-2）表达的影响。方法：SD早孕大鼠采用灌胃米索前列醇（100 μg?kg-1）和米非司酮（8、3 mg?kg-1）造成不完全流产大鼠模型，随机分为模型组（等容量蒸馏水）、阳性药物益母草颗粒组（4、3 g?kg-1）、桃红四物汤高、中、低剂量组（18、0，9、0，4、5 g?kg-1），受孕大鼠作为正常对照组（等容量蒸馏水）。连续灌胃7 d后腹主动脉取血及大鼠子宫组织，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中Ang-1和Ang-2的含量，采用免疫组化检测子宫组织的Tie-2及微血管密度（MVD）CD34的表达情况。结果：桃红四物汤显著增加药物流产后大鼠子宫的血管微密度，显著升高血清中Ang-1，Ang-2的含量，并使子宫组织中Tie-2的表达显著增加。结论：桃红四物汤有明显的促进不完全流产早孕大鼠子宫血管新生作用，作用机制可能与调节血清中Ang-1和Ang-2的浓度及子宫组织中Tie-2的表达相关。 　　[关键词] 桃红四物汤；MVD；Ang-1；Ang-2；Tie-2 　　[收稿日期] 2013-05-06 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目；安徽省高校自然科学基金项目（KJ2011A89） 　　[通信作者] *彭代银，教授，Tel：（0551）5169189，E-mail： pengdy@ahtcm、edu、cn 　　[作者简介] 梁杰，硕士研究生，TelE-mail：260266215@qq、com 桃红四物汤源于清朝著名医家吴谦所著的《医宗金鉴》，是由四物汤（白芍、熟地黄、川芎、当归）加桃仁、红花组成，是妇科血瘀证尤其产后血瘀诸证治疗常用方、祛瘀生新的代表方。四物汤以补血而不滞血，和血而不伤血为特点，为治疗血病通用之方，多用于血虚而又血行不畅的疾病。桃红四物汤在四物汤的基础上加用桃仁、红花二味，加重其活血化瘀生新之效。根据我国传统医学理论：“瘀血不去，新血不生，祛瘀生新”。产后或者药物流产后，出血时间延长主要原因是瘀血内停，妊娠物留于子宫内，导致子宫内膜的新生修复延缓，出血延长[1]。而子宫内膜的新生修复与子宫内膜血管的新生密切相关，在众多的减少产后或药物流产后子宫出血环节中子宫内膜血管的新生是极为重要的一个环节[2]。近年来对桃红四物汤的药理研究较多，但多数为探究其祛瘀的药理作用及机制，而对其生新作用及机制研究较少。结合本课题组前期证实桃红四物汤可以改善产后血瘀大鼠的血流状态[3]，对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞具有保护作用[4]，同时可以调节内皮细胞VEGF的释放[5]，而VEGF含量的变化与血管内皮细胞的增殖密切相关。本研究考察桃红四物汤对米非司酮和米索前列醇致早孕流产大鼠子宫内膜的微血管密度的影响，并初步研究其机制，为进一步阐明桃红四物汤对产后子宫保护的作用机制奠定基础。 　　1 材料 　　1、1 动物 健康SD大鼠，雄鼠25只，体重260～300 g，雌鼠60只，体重230～260 g，购自安徽省实验动物中心，许可证号SCXK（皖）2011-002。 　　1、2 药物与试剂 桃红四物汤（THSWD，桃仁、红花、当归、川芎、熟地黄、白芍，购自合肥乐家老铺中药饮片有限公司，所购药材经本校周建理教授鉴定），各药材按复方配比[5]，用75%乙醇提取，旋转蒸发，减压干燥至干粉；阳性对照药物：益母草颗粒（山东健民药业有限公司，批号120308）；米非司酮片（北京紫竹药业有限公司，批；米索前列醇片（北京紫竹药业有限公司，批；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批；大鼠Ang-1酶联检测试剂盒、大鼠Ang-2酶联检测试剂盒（上海绿叶生物技术有限公司，批号121110）；Tie-2兔抗鼠多克隆抗体，CD34兔抗鼠多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）。 　　1、3 仪器 倒置显微镜；iMARK型酶标仪（BIO-RAD）；Centrifuge 5417R型离心机（eppendorf）；DNP-9052BS-Ⅲ型电热恒温箱（上海新苗医疗器械厂）；ALC210型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电子天平（上海天平仪器厂）。 　　2 方法 　　2、1 模型复制 参照文献方法[6]，将购买的大鼠适应性喂养1周，将大鼠于每日8：00按雌雄比2∶1的比例合笼，次日5：00进行阴道图片检测，以在显微镜中发现精子为计时妊