口服酵母多糖对异育银鲫抗.docVIP

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口服酵母多糖对异育银鲫抗“鳃出血”病原感染的作用 本文探讨了口服酵母多糖对异育银鲫体内免疫相关物质活性与人工感染“鳃出血”病原抗病力的影响,试验结果证明酵母多糖可提高供试异育银鲫体内免疫相关物质的活性,也可增强异育银鲫抵抗“鳃出血”病原感染的能力,对鱼类的生长、体色等无不良影响。本试验由江苏省水产三新工程项目(编号:D2013-5-1)资助。 数十年来,利用各种抗生素类药物或者化学药物防控养殖鱼类的传染性疾病是常用的措施。但是,药物引起的病原菌耐药性和养殖水体中微生态环境失衡等问题,已经逐渐成为水产养殖业中日益严峻的问题。为了避免采用药物防治养殖鱼类的传染性疾病引起的各种问题,国内、外的研究者在利用免疫刺激剂预防养殖鱼类传染性疾病方面,也已经做了不少研究工作。目前,在国外已经有不少种类的免疫刺激剂正在水产养殖业中应用。 本研究利用安琪酵母股份有限公司生产的酵母多糖投喂异育银鲫(Carassius auratus gibelio)后,检测了供试异育银鲫体内免疫相关物质活性的变化与抵抗人工感染“鳃出血”病原的能力。 1材料与方法 1、供试异育银鲫与饲养条件试验在盐城裕达水产养殖场池塘中设置的网箱中进行。将来源相同、活泼无外伤的体重为(113.5±5.5)g的异育银鲫,仔细挑选规格相近的放在同一个网箱中饲养。在同一个池塘中放置的30个条件相同网箱中选择的7个网箱(分别作为Ⅰ-Ⅶ组),每个4.0m×4.0m×1.5m的网箱内饲养500尾异育银鲫(图1),在试验期间温度变化在17.5-25.5℃之间。每天上午8:00、中午13:00和下午16:30各投喂饵料1次,投饵量以使异育银鲫达到饱足并有少量剩余为准。所用饲料为惠裕饲料科技有限公司生产的异育银鲫专用饲料。 2、酵母多糖用于本研究的免疫增强剂是安琪酵母股份有限公司以医药专用酵母生产的福邦牌酵母多糖,该产品中含有的β-葡聚糖≥20%,α-甘露聚糖肽≥20%,肽类及蛋白质≥30%,几丁质≥2.0%。 3、酵母多糖投喂剂量与程序根据各组试验异育银鲫的总体重,在定量的饲料中添加不同剂量的酵母多糖,制作成内含不同水平的酵母多糖的颗粒饲料后分别投喂Ⅰ-Ⅵ组试验异育银鲫,即自I号至Ⅴ号网箱的投喂免疫增强剂的剂量分别为100 mg/kg.B.W、200.0 mg/kg.B.W、300.0 mg/kg.B.W、400.0 mg/kg.B.W、500.0 mg/kg.B.W和600.0 mg/kg.B.W。Ⅶ号网箱的试验异育银鲫则投喂未添加酵母多糖的饲料,作为对照组。每天投喂相当于鱼体重2.5%的饲料,连续投喂28d。 4、采血于免疫接种并投喂添加酵母多糖饲料后的第29d,从各组中分别随机捞取15尾供试异育银鲫,对其断头取血。将每尾鱼的血液分为2份,其中1份以肝素抗凝,制备抗凝血,供检测白细胞吞噬活性;将另一份血液首先在室温下静置1 h待其凝固,置4℃冰箱保持4 h后,于4℃条件下以4000 r/min离心10 min,收集上层血清,保存在4℃冰箱中,备用。 5、在0.2 mL抗凝血中加入0.1 mL 福尔马林灭活的金黄色葡萄球菌,摇匀,在25℃的恒温水浴锅中孵育45 min,每隔10 min摇动1次。用吸管吸取血细胞涂片,每个样品涂5张,用甲醇固定10 min,Giemsa染色液染1 h,水洗风干后,镜检,并依下式计算白细胞吞噬百分比(phagocytic percentage,PP)和吞噬指数(phagocytic index,PI)。 吞噬百分比(PP) =(100个吞噬细胞中参与吞噬的细胞数/100)×100 吞噬指数(PI )= 细胞内总菌数/参与吞噬的细胞数 6、溶菌酶活性的测定用0.067mol/L的磷酸缓冲液(PBS,pH 6.4)将溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)配制成0.2 mg/mL 的菌悬液。每个样品取3.0 mL菌悬液,吸取血清0.04 mL加入到菌悬液中,混匀后,立刻在540 nm下测定A。值。然后在28℃水浴中温育30 min,取出后置于4℃冰浴终止反应,再测定A值。计算溶菌酶活性单位:U = (A。- A)/ A 。 7、血清中谷丙转氨酶活性的测定采用谷丙转氨酶试剂盒(上海科欣生物技术研究所产品,批号测定。 8、血清中总蛋白含量的测定采用血清总蛋白试剂盒(上海科欣生物技术研究所产品,批号测定。 9、攻毒从试验和对照组网箱中随机各捞取50尾供试异育银鲫,放养在盛水2.0M3的圆形塑料水族箱中充气饲养。在每个水族箱中放置5尾体重300.0g左右的具有“鳃出血”典型症状的病鱼,与50尾供试鱼同居饲养2d后将其捞出,将供试鱼继续饲养观察21d。对在此期间死亡的异育银鲫进行解剖观察,判断是否由于感染“鳃出血”疾

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