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检测分泌r干扰素T细胞对诊断儿童结核意义 　　【摘要】 目的：探讨分泌r-IFN的结核杆菌特异性T细胞检测对儿童结核感染的诊断意义。方法：用流式细胞术胞内细胞因子（cytokine flow cytometry，CFC）检测法，对结核病患儿41例、潜伏结核感染（latent tuberculosis infection，LTBI）75例、健康儿童20例，测其外周血中分泌r-干扰素（IFN-r）的结核杆菌特异性CD4+T淋巴细胞；同时行结核菌素皮试（TST）和结核抗体检测。结果：（1）CFC检测，41例结核病患儿90.24%阳性，9.76%阴性；健康组1例阳性，说明该检测方法特异性为95%。（2）结核病组CFC阳性率90.24%，TST阳性率70.73%，结核抗体阳性率56.10%，与CFC比较差异均有统计学意义（P0.05）。（3）LTBI组CFC阳性率85.33%，TST阳性率85.33%；结核抗体阳性率为28%，与CFC比较差异有统计学意义（P0.01）。结论：（1）诊断儿童结核病，分泌r-IFN的结核杆菌特异性T细胞流式检测的敏感性、特异性比TST、结核抗体强。（2）诊断潜伏结核感染，分泌r-IFN的结核杆菌特异性T细胞流式检测与TST效果类似，比结核抗体强。 　　【关键词】 特异性T细胞； 流式细胞术； 结核； 儿童； 诊断 　　结核菌素皮试（TST）是诊断儿童结核病传统的免疫学诊断方法，但其敏感性和特异性受诸多因素的影响：如非结核分枝杆菌感染有交叉阳性；急性粟粒性肺结核、结核性脑膜炎（TMB）患者可为假阴性反应。培养结核杆菌是诊断结核的金标准，但需要时间长，且阳性率低。因此，寻找新的特异性高、敏感性强、快速的结核感染诊断方法成为儿科医生关注的热点。 　　Mahairas等在1996年发现的一段存在结核分枝杆菌中名为“RD1”的基因序列[1]，该序列编码产生两种蛋白：早期分泌型抗原靶蛋白（ESAT-6）和培养滤过蛋白10（CFP-10），这两种蛋白作为特异性抗原可刺激机体特异性T细胞产生IFN-r。体外检测IFN-r释放的方法，逐渐成为结核病早期诊断研究的新方向。 　　本实验通过建立流式细胞术胞内细胞因子检测法（cytokine flow cytometry CFC），检测结核病组、潜伏结核感染组、健康对照组三组外周血分泌r-干扰素（IFN-r）的结核杆菌特异性CD4+T细胞比例。同时将CFC检测法结果与TST、结核抗体结果进行对比分析，探讨CFC检测分泌IFN-r的结核杆菌特异性T细胞在儿童结核病及潜伏结核感染中的诊断价值。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 2008年1月-2010年1月苏州大学附属儿童医院门诊及住院部0～14岁健康对照组20例；潜伏结核感染患儿75例，疑似结核病患儿86例。 　　1.1.1 纳入标准 临床疑似结核病纳入标准，至少具有以下2项或2项以上表现：（1）发热或咳嗽2周以上；（2）胸部X线检查有疑似肺结核的征象；（3）临床上有脑膜炎/脑炎表现、脑脊液改变符合结核性脑膜炎；（4）颈淋巴结肿大，TST阳性；（5）关节疼痛伴影像学检查提示结核。潜伏结核感染者纳入标准：TST阳性除外卡介苗接种后反应，X线胸片临床无活动性结核病证据，视为潜伏结核感染[2]。健康对照组来源于本院儿童保健门诊健康体检者，卡疤阳性，既往无结核病史及结核病接触史，无基础疾病。 　　1.1.2 所有入选对象均已接种BCG，并记录详细的临床资料。综合临床资料及相关检查，最终诊断为结核病者41例（抗结核治疗有效），其中肺结核病17例，肺外结核病24例。进行以下分组：A组：结核病组，41例，男22例，女19例，年龄5个月～14岁，平均（5.05±2.43岁），其中肺外结核病24例（结核性腹膜炎1例、骨关节结核2例、淋巴结结核6例、结核性脑膜炎15例）。肺结核17例（血性播散型肺结核1例、结核性胸膜炎4例、原发性肺结核12例）。B组：潜伏结核感染组75例，男44例，女31例，年龄2个月～14岁，平均（4.76±3.69）岁。C组：健康对照组20例，男13例，女7例，年龄2个月～14岁，平均（3.82±2.56）岁。 　　1.2 方法 每组研究对象均进行CFC、TST及结核抗体检测，治疗随访3～6个月。 　　1.2.1 CFC检测法所用试剂 ESAT-6、CFP-10结核杆菌特异性抗原（上海复兴医学诊断有限公司）；离子酶素（INO1μg/ml）（美国SIGMA 公司）；Brefeldin（BFA）（美国SIGMA 公司）；FastImmunIFN-r-FITC-CD69PE-CD4PEPCR-CY5.5（美国BD公司）。 　　CFC检测法简要步骤：肝素钠抗凝真空管采集入选患儿外周血1 ml，取三只流式测