畲药十二时辰水煎剂急性毒性实验研究.docVIP

畲药十二时辰水煎剂急性毒性实验研究 　　【摘要】目的：研究畲药“十二时辰”水煎剂对小鼠的急性毒性，以初步评价其安全性。方法：以不同剂量“十二时辰”水煎剂对小鼠灌胃，观察毒性症状，记录死亡情况，并计算最大耐受量（MTD）、最小致死量（MLD）及半数致死量（LD50）的值。结果：小鼠口服“十二时辰”水煎剂的最大耐受量（MTD）为2744g/kg，最小致死量（MLD）为392g/kg，半数致死量（LD50）为6008g/kg。结论：“十二时辰”临床应用时，需严格控制口服剂量。 　　【关键词】十二时辰；急性毒性；最大耐受量；最小致死量；半数致死量 　　【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）08-0027-03 　　“十二时辰”为毛茛科植物重瓣铁线莲Clematis florida Thunb var.plena DDon的干燥根[1]，为福建福安畲医习用药。《福安畲医畲药》记载，其性温、味辛，具有通经活络、通关窍、怯风除湿、活血止痛、理气通便、利尿、解毒等功效，主治跌打损伤，关节肿痛，虫蛇咬伤[2]；《中华本草》记载其“味苦、微辛； 性温，小毒，归肝、脾、肾经，可利尿、通络、理气通便、解毒”，主治风湿性关节炎、小便不利、闭经、便秘腹胀、风火牙痛、眼起星翳、虫蛇咬伤、黄疸等[3]，是一味地方特色鲜明的民族药，值得进一步研究并加以开发应用。关于十二时辰的化学成分，近年已有相关报道[4-5]，其主要活性成分包括棕榈酸及其甲酯、乙酯以及齐墩果酸等。但迄今为止，对于“十二时辰”及其原植物重瓣铁线莲的安全性评价还未见文献报道。研究通过小鼠口服不同剂量“十二时辰”水煎剂，观察毒性症状，记录死亡情况，并计算最大耐受量（MTD）、最小致死量（MLD）及半数致死量（LD50）的值，为其临床安全使用奠定基础。 　　1仪器与材料 　　11仪器与试药YP502N电子天平（上海精密科学有限公司）、WK2102电磁炉（美的），“十二时辰”生药（批号购买自福建福安。 　　12实验动物清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体重20～22g，购自上海斯莱克实验动物中心（合格证号：SCXK（沪）2012-0002），光暗周期12/12 h（光照时间8∶00～20∶00）下饲养，自由饮食，室温保持 18～22℃，相对湿度 40%～70% ，实验前适应性喂养3d。 　　2方法 　　21水煎剂制备用电子天平称取“十二时辰”药材400g，加水12倍体积煎煮1h，再先后加水10倍体积和8倍体积各煎煮05h，合并三次煎煮液，浓缩至200mL，即得2g/mL浓缩液备用，用时再用蒸馏水配成相应浓度。 　　22最大耐受量和最小致死量的测定预试验中，80g/kg剂量的“十二时辰”水煎剂灌胃造成小鼠全部死亡，而8g/kg及08g/kg两剂量无死亡。因此正式试验中，在80g/kg和8g/kg剂量之间，以070等比组距，设置5个剂量组，其剂量分别为56g/kg、392g/kg 、2744g/kg、192g/kg、1344g/kg。 　　实验动物随机分为5个实验组及1个空白对照组，每组10只，雌雄各半，实验前禁食不禁水16h。各实验组按04mL/10g体重灌胃给予上述剂量“十二时辰”水煎剂，空白对照组给予等体积的蒸馏水，观察其毒性症状，记录死亡情况，确定小鼠口服“十二时辰”水煎剂的最大耐受量（MTD）和最小致死量（MLD）。 　　23LD50的测定参考22结果，经预试验，得出小鼠口服“十二时辰”水煎剂的100%致死量（Dm）为64 g/kg，0%致死量（Dn）为328g/kg，两者之比接近2倍。故根据改良寇氏法（Krber氏法）[6]，参考Dm和Dn，以085等比组距，设置6个剂量组，其剂量分别为753g/kg、64g/kg、544g/kg、462g/kg、393g/kg、334g/kg。 　　实验动物随机分为6个实验组及1个空白对照组，每组10只，雌雄各半，实验前禁食不禁水16小?r。各实验组按04mL/10g体重灌胃给予上述剂量“十二时辰”水煎剂，空白对照组给予等体积的蒸馏水，观察其毒性症状，记录死亡情况，并计算小鼠口服“十二时辰”水煎剂的半数致死量（LD50）。 　　24统计描述及LD50计算方法实验数据以各实验组动物死亡率表示，LD50采用改良寇氏法计算，计算公式如下： 　　LD50=log-1{Xm-i[∑p-（3-pm-pn）/4]} 　　其中：Xm为最大剂量组剂量的对数；i为相邻两组高剂量与低剂量之比的对数；p为各组动物的死亡率；∑p为各组p值之和；pm为最高剂量组死亡率；pn为最低剂量组死亡率。 　　LD50的95%可信区间计算公式如下： 　　LD50的95%可信区间=LD50±45LD50