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竹荪水提物体外抗氧化活性研究 　　摘要：采用回流提取法对竹荪中的水溶性成分进行提取，分别测定提取物的总还原能力及对?OH、DPPH?的清除作用，并与合成抗氧化剂维生素C进行比较。结果表明：竹荪水提物对?OH、DPPH?具有不同程度的清除能力，但均低于维生素C。研究结果为竹荪的抗氧化、抗衰老等作用的研究提供了一定参考。 　　关键词：竹荪；水提物；体外抗氧化；抗衰老作用；保健价值 　　中图分类号：R284.1；S646.801 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0347-02 　　自由基又称游离基，其性质非常活泼，能与其他任何惰性物质在惰性条件下发生连锁反应。存在于人体的自由基，在生理情况下能提高机体免疫力，而在病理情况下，则会对组织产生不可逆的损伤，直接导致许多疾病的发生[1]。因此，从食物中寻找安全有效的清除自由基成分，成为了人们日渐关心的问题。 　　竹荪别称竹参、面纱菌，为鬼笔科竹荪属真菌，是寄生在枯竹根部的一种隐花菌类，也是一种名贵的食用菌，具有滋补强壮、益气补脑、宁神健体等功效，自古就被列为草八珍之一。现代医学研究也证明，竹荪中含有能抑制肿瘤的成分[2]；另有报道指出[3]，竹荪中富含蛋白质、脂肪、微量元素，此外还含有丰富的多糖，是难得的营养佳品。目前，对于竹荪的研究多集中于对其抗菌作用的评价[4-5]以及多糖抗氧化作用的评价方面[6]，而未见关于其水溶性成分总体抗氧化作用的报道。由于竹荪多以水溶性部位供人们食用，因此本研究以竹荪水提物作为样品，探索其对羟自由基（?OH）、DPPH自由基（DPPH?）的清除能力以及其总还原能力，以期为综合评价竹荪的食用、保健价值提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　竹荪购于四川省绵阳市本地市场，经绵阳师范学院天然药物研究所边清泉教授鉴定，为鬼笔科竹荪属植物竹荪（Dictyophora indusiata）。 　　主要试剂为二苯代苦味酰基自由基（DPPH?）（美国Sigma公司）、维生素C（四川科龙试剂有限公司）；硫酸亚铁、双氧水（30%）、邻二氮菲、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙醇（95%）、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁，均为四川科伦试剂公司的分析纯试剂。试验用水为1次蒸馏水。 　　1.2 主要仪器 　　主要仪器为：UV-1700紫外分光光度计（日本岛津公司）；800型高速离心机（江苏省金坛市通济仪器厂）；AY120 型电子分析天平（日本岛津公司）。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 竹荪水提物的制备 将竹荪洗净烘干后，粉碎至过80目筛；准确称取5.000 0 g竹荪粉末于圆底烧瓶中，加入150 mL蒸馏水（料液比1 g ∶30 mL），于95 ℃下回流提取 2 h；过滤并将滤液浓缩后，用蒸馏水配制成浓度为5 g/L的溶液，置于4 ℃冰箱中保存备用。 　　1.3.2 对照品维生素C溶液的配制 准确称取0.500 0 g维生素C，用蒸馏水溶解后转移至100 mL容量瓶中定容，得浓度为5 g/L的溶液，避光保存备用。 　　1.3.3 羟基自由基（?OH）清除试验 Fenton反应是产生羟自由基的经典反应，其机理如下： 　　Fe2++H2O2→Fe3++?OH+OH-。 　　此体系产生的?OH，可使体系中橙红色络合物Fe2+-邻二氮菲被氧化为Fe3+-邻二氮菲，致使体系颜色变浅，从而在536 nm处的最大吸收峰消失。如果在加入H2O2前加入羟自由基清除剂，则Fenton反应产生的羟自由基被清除或部分清除，此氧化过程受到抑制，使得该吸收波长下吸光度降低不明显，因此可以通过测定536 nm处的吸光度来判断受试物的抗氧化能力[7]。试验设为5组：空白组、未损伤组、损伤组、样参组、样品组，对照品为维生素C。 　　按照表1所示加入反应试剂，并分别加入不同体积提取液（0.2、0.6、1.0、1.4、1.6 mL），将各反应管摇匀后，置于恒温水浴中，于37 ℃下保温60 min，于536 nm处测定吸光度，按下式计算羟自由基清除率： 　　?OH清除率=（D2-D1）-（D3-D4）D0-D3×100%。 　　式中：D0为未损伤管吸光度；D1为样参管吸光度；D2为样品管吸光度；D3为损伤管吸光度；D4为空白管吸光度。 　　1.3.4 DPPH自由基清除试验 按表2的方法进行加样，并加入不同体积提取液（0.2、0.6、1.0、1.4、1.6 mL），于室温下避光反应20 min，将对照组进行光谱扫描，以出现最大吸收峰的波长为测定波长。经光谱扫描可知，DPPH自由基模型反应中显色产物的最大吸收波长为517 nm，因此选择在517 nm下测定各组受试物的吸光度，以维生素C为对照品。 　　通过测定各溶液的吸光度，按