脂易消对NAFLD大鼠Visfatin RNA表达影响.docVIP

脂易消对NAFLD大鼠Visfatin RNA表达影响 　　摘要：目的 观察脂易消对实验性NAFLD大鼠肝组织病理学及Visfatin RNA影响，探讨脂易消治疗NAFLD的作用机理。方法 采用高脂饮食制备NAFLD大鼠模型。大鼠分低、中、高剂量脂易消治疗组、易善复阳性对照组、生理盐水对照组、正常对照组。肝组织常规HE染色，观察肝细胞脂肪变性、炎症活动程度；采用RT-PCR法检测大鼠肝脏中Visfatin RNA的表达水平。结果 脂易消各治疗组大鼠血清ALT、AST水平与模型组比较有显著性差异（P0.05）。结论 脂易消能改善肝细胞炎症活动度，减轻肝组织损伤，降低肝组织Visfatin RNA表达水平，其疗效与易善复相似（P0.05）。其治疗NAFLD机理可能与脂易消降低肝组织Visfatin RNA表达水平有关。 　　关键词：非酒精性脂肪性肝病；大鼠；VisfatinmRNA 　　非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是遗传-环境-代谢应激相关因素所致，以肝细胞脂肪变性为主的临床病理综合征，其发病率逐年增高，是21世纪全球重要的公共健康问题之一[1]，流行病学调查显示，NAFLD已成为欧美等国的慢性肝病中的第一大病种，其肝纤维化的发生率高达25%，约1.5%～1.8%的患者有进展为肝硬化的可能[2～4]。在我国亦有超过乙肝病毒成为慢性肝病首要病因的趋势[5、6]，加强NAFLD的防治，提高患者的生活质量，延缓和阻止NAFLD的发生、发展成为当前中西医研究的热点。 　　NAFLD的发病机理至今尚未明确，近年有学者认为脂肪细胞因子在肝脂肪变性进程中可能起着十分重要的作用。其中内肥素（Visfatin）因具有类胰岛素作用可降低血糖、参与脂肪代谢等生理环节而备受关注[7]。本实验采用高脂饮食喂养制备NAFLD大鼠模型，通过中药验方脂易消予以干预，阐明Visfatin与NAFLD发病的相关性，探讨NAFLD的发病机理和中医药治疗NAFLD的作用机制。 　　1 资料 　　1.1实验动物 清洁级SD大鼠60只，雄性，体重（180±10）g，由中科院上海实验动物中心提供，饲养于浙江中医药大学实验动物中心，室温23℃，湿度50%，明暗各12h，随机分笼喂养，自由饮水和采食，预养1w后进入实验阶段。 　　1.2药物 脂易消：半夏、枳壳、荷叶、水飞蓟、泽泻等生药材购自浙江省杭州市方回春堂国药馆。易善复胶囊（多烯磷脂酰胆???胶囊）：北京万安特制药有限公司，228mg/粒，批号：D1141。生理盐水：浙江莎普爱思药业有限公司，批号：110313-3。 　　1.3器材 OLIMPUS显微镜，日本OLYMPUS公司。Hoefer300电转仪；IS1000凝胶成像仪；MyCycler PCR仪；The BioRadiCyclerIq PCR仪；Optical Caps （8 Caps/Strip） （Applied Biosystems； Cat # 4323032）；Optical Adhesive Covers （Applied Biosystems； Cat # 4311971，美国BioRad公司。ZF-90型暗箱式紫外透射仪，上海顾村电光仪器厂。DYY-6B型稳压稳流电泳仪，北京市六一仪器厂。Ultrospec3300pro微量核酸测量仪，Ampersand。可调微量加样枪，Thermo Labsystems。-80℃低温冰箱，Sanyo。AR2130电子精密天平OhausCorp.Pine Brook，NJ，USA。WD900TL23-2微波炉，Galanz。YDS-3S液氮生物容器，四川亚西机器厂。PCR管，广东惠州俊达塑料制品有限公司。 　　1.4试剂 氯仿（分析纯）浙江迪耳药业有限公司。异丙醇（分析纯），浙江杭州双林化工试剂厂。琼脂糖（agarose）溴化乙锭（EB），上海生工生物工程技术服务有限公司。M-MLV RTase，invitrogen。Taq酶，Oligod（T）18Primers，RNase inhibitor，dNTP，100bp marker等。 　　2 方法 　　2.1造模与分组 将60只雄性SD大鼠随机分成脂易消低、中、高剂量治疗组，易善复阳性对照组，模型对照组和正常对照组6组，每组10只。正常组予普通饲料喂养，其余予高脂饲料喂养，造模12w后处死动物。 　　2.2给药途径及剂量 实验剂量按照实验动物研究等效剂量的计算方法[8]（50kg体重人/200g体重大鼠转换系数r=0.021）计算等效脂易消剂量。实验过程中脂易消低、中、高剂量治疗组组分别灌以相当于成人临床用量3、6、12倍的脂易消稀释液，易善复阳性对照组灌以相当于成人临床用量6倍的易善复胶囊混悬液[8]，模型对照组和正常对照组组均灌以同