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胚挽救技术应用于无核葡萄育种研究进展 　　摘要植物的胚挽救技术在无核葡萄的育种研究中发展迅速,通过对胚挽救技术及其在无核葡萄育种上的应用以及影响胚挽救的因素进行综述,指出了葡萄胚挽救技术存在的不足,并对其今后研究方向提出展望。 　　关键词 胚挽救技术;无核葡萄育种;应用;研究进展 　　中图分类号S663.1文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)09-0019-02 　　无核鲜食葡萄（Vitis vinifera L．）一直深受广大消费者的喜爱。无核性状作为葡萄重要的商品性状是当前葡萄育种的重要目标之一。20世纪以有核品种为母本的有性杂交方式选育效益很低，随着胚挽救技术的应用，极大地缩短了无核葡萄选育的育种周期，使无核葡萄的育种有了长足地发展。将胚挽救技术用于无核葡萄育种是十分有效的，并为解决无核葡萄育种中的问题开辟了新思路。 　　1 无核葡萄的胚挽救技术 　　无核葡萄根据其授粉结实的特性可分为2类：一类称单性结实型（Parthenocarpy），就是卵细胞不经过受精作用而直接发育成果实；另一类称假单性结实型（Pseudo-Parthen-ocarpy），即种子败育型（Stenospermocarpy），就是虽受精，但受精后的胚很快停止发育导致无核果实产生，这种类型的品种占无核品种的85%以上。 　　胚挽救技术就是通过选择假单性结实类型的无核品种，在其合子胚败育之前进行人工离体培养，减少幼胚的败育，利用胚乳及培养基中的营养使其发育成充实的胚，最终形成完整的植株。之前，以有核材料（母本）×无核材料（父本）的杂交方式培育的无核葡萄品种的无核比率很低，且选育1个品种的周期非常长（10年以上）。现利用胚挽救方法可进行“无核×无核”方式杂交，通过胚挽救其后代来培育无核品种，并结合现代生物技术，从而使无核比率成倍提高，且大大缩短了品种的选育时间。 　　2 胚挽救技术在无核葡萄育种上的应用 　　2.1 培育无核葡萄品种 　　无核葡萄品种间杂交或以无核葡萄品种作母本进行杂交是培育无核葡萄品种的有效途径，而胚挽救技术使这种杂交方式成为现实。从Ramming等首次报道利用胚挽救技术获得无核葡萄实生苗以来，世界各国利用该方法相继获得了许多无核葡萄新资源，且??育出优良的无核葡萄品种。并通过深入研究基因型、培养基、取样时期以及它们间的相互作用对无核葡萄胚珠培养的影响，建立了辅助无核葡萄育种的胚挽救技术程序[1]。我国自20世纪90年代后也相继开展了此项研究，并打下了一定的实践基础。程和禾等[2]通过对接种时期、基本培养基和激素配比、低温等因素的研究，建立了较为简单实用的奥迪亚无核葡萄幼胚抢救体系，为奥迪亚无核葡萄作母本进行杂交育种奠定了技术基础。唐冬梅、闫爱玲等通过大量试验对胚挽救的多个影响因素进行了进一步地研究和验证，更加完善了胚挽救技术在无核葡萄育种上的辅助应用程序[3，4]。 　　2.2 克服杂交不亲和 　　远缘杂交是将野生种抗性基因组转移至栽培品种，或将不同种的优良基因重组的一种有效育种方式。由于远缘杂交杂种胚、胚乳和子房组织间缺乏协调性，致使杂种胚部分或全部坏死，有时受精后的幼胚不发育或中途停止发育，导致难以获得杂种苗。胚挽救技术在克服远缘杂交的不亲和性方面发挥了巨大的作用[1]。Goldy和Ramming等首先通过胚挽救技术，分别获得了多株胚挽救苗。我国首次利用无核葡萄×中国野生葡萄杂交结合胚挽救技术，获得51株杂种后代。李金月等[5]用无核葡萄与抗性强的有核葡萄杂交获得无核、抗性强、可利用的杂种后代，改变了无核葡萄抗性差的弊端。可见，胚挽救技术是克服远缘杂交不育的一种有效方法。 　　2.3 三倍体育种 　　三倍体育种是获得优质大粒、抗病及抗逆性好的无核葡萄品种的重要途径之一。获得三倍体无核葡萄，最有希望的方法是二倍体与四倍体间的杂交。郭印山等对二倍体与四倍体葡萄杂种胚珠采取横切的方法获得了三倍体植株，并采用L25（55）的正交试验证明了影响胚挽救成苗率最重要的是接种时间， 然后是各种植物激素的浓度[6]。而闫爱玲等[4]以二倍体葡萄为母本，与四倍体葡萄杂交，杂种进行胚珠培养，获得了三倍体植株，并通过试验确定了不同成熟期胚挽救的取样时期可以根据母本品种成熟期来确定。 　　2.4 分子标记技术辅助无核葡萄育种 　　分子标记是DNA水平的标记，能够稳定遗传，可以反映生物个体和群体特性。由于常规育种中对目标性状选择耗时、费力且容易出现偏差，因此分子标记在葡萄育种中的应用将提高葡萄遗传育种的效率和精确度，并可用于杂种后代的无核性、抗病性及抗寒性等品种的早期鉴定。有研究者先后采用RAPD方法及AFLP技术法对葡萄无核基因进行了研究。Scott等[7]首次利用AFLP技术对Flame seedless 的