胎膜早破与细胞凋亡调控基因Bcl―2Bax和细胞色素―C相关性研究.docVIP

胎膜早破与细胞凋亡调控基因Bcl―2Bax和细胞色素―C相关性研究 　　【摘 要】目的：研究细胞凋亡增加是否为胎膜早破的一个发病机理和危险因素。方法：随机选择经阴道分娩的足月初产妇60例的胎膜，其中胎膜早破30例作为研究组，余30例 为对照组。结果：采用免疫组化法检测两组胎膜组织中细胞凋亡调控因子（Bax、Bcl-2）及细胞色素C（Cyt-C）的表达情况的阳性表达率高于对照组（p0.005）。结论：胎膜早破的发生与促凋亡蛋白Bax、Cyt-c表达的增强相关，基因调控下胎膜细胞凋亡增加可能是胎膜早破的一个重要发病机制。 　　【关键词】胎膜早破；细胞凋亡；Bcl-2；Bax；细胞色素C 　　【中图分类号】R714 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）05-2742-01 　　胎膜早破（Premature rupture of membranes，PROM）是指临产前的胎膜破裂，是严重威胁母儿健康的产科常见并发症。近年来有关胎膜早破的病因学方面的研究日趋增多。目前主要是从分子和基因水平上探讨胎膜本身结构的变化，研究表明胎膜中存在凋亡并受一些凋亡调节基因的调控[1]，但胎盘上的凋亡调控机理尚无定论。本研究皆在通过免疫组化技术了解细胞凋亡调控基因Bcl-2、Bax、细胞色素-C（Cytochrome-c，Cyt-c），在胎膜中的表达及相互关系，探讨其在PROM中的作用，明确其是否为PROM的一个发病机制或危险因素，为胎膜早破的预防和治疗提供科学的依据和新思路。 　　1 资料与方法 　　1.1研究对象 　　随机选择2009年12月至2011年1月在我院妇科科住院的经阴道分娩的足月初产妇60例，其中30例PBOM孕妇作为研究对象（PROM组），排除机械性损伤和多胎、胎位异常、头盆不称等原因所至的PROM，临床无感染征象，无其他产科合并症和并发症，近期无外伤和性交等明显诱因，且PROM组均在破膜12h以内分娩；未发生PROM的孕妇作为正常妊娠组（对照组），符合上述条件，并与研究组年龄、孕周相对应。 　　两组孕妇年龄、孕周、孕次及新生儿体重的差异均无统计学意义，资料具有可比性。PROM诊断标准按乐杰主编的第6版《妇产科学》[2]中的相关标准。 　　1.2方法 　　1.2.1标本采集：两组孕妇均在胎盘娩出后10min内于胎膜破裂口处3cm内采取2cmX2cm的新鲜羊膜组织。标本采取后立即用生理盐水洗净血迹，无菌棉签试蜕膜组织后，置入4%甲醛溶液中固定，常规石蜡包理标本，连续4μm厚切片4张，其中3张备免疫组化染色用，另1张备随机抽取予PBS染色行阴性对照。 　　1.2.2实验方法：用免疫组化SP法分别检测标本中的Bas、Bcl-2、Cyt-c的性表达。北京中杉金桥生物技术有限公司提供鼠抗人Bax单克隆抗体、鼠抗人Bcl-2单克隆抗体及鼠抗人Cyt-c单克隆抗体，SP系列工作盒和显色剂试剂盒。染色按试剂盒说明操作、抗稀释度1：50，磷酸盐缓冲液代替-抗作阴性对照，分别用已知Bax、Bcl-2、Cyt-c阳性组织切片作阳性对照。 　　1.2.3结果判定[3] ：光学显微镜下观察，以细胞浆内出现浅黄色、黄色或棕黄色沉着，染色明显高于背景为阳性细胞。每例标本随机选取5个高倍视野（X400），计算每个视野阳性细胞比例得分和染色强度得分，以5个视野的平均值确定阳性细胞比例得分和染色强度得分，以5个视野的平均值确定阳性表达度。阳性表达度=阳性细胞得分+染色强度得分：①阳性细胞评定标准：无阳性细胞=0分；阳性细胞50%=3分；②染色强度评定标准：不着色=0分，浅黄色=1分，黄色=2分，棕黄色=3分，均值0分为阴性（一），1～2分为弱阳性=（+），3～4分为中度阳性（++），5～6分为强阳性（+++）。 　　1.3统计学方法 　　应用SPSS11.5软件进行统计学处理，各数据用x±s表示。采用t检验，x2检验，p0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　Bcl-2、Bax、Cyt-c阳性反应物：Cyt-c和促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2在绒毛膜滋养细胞和羊膜上皮细胞、成纤维细胞及间质胞浆内均有表达。两组中Bcl-2阳性表达率无统计学差异；PROM组Bax和Cyt-c的阳性表达率均高于对照组，差异有显著性意义，见表1-3。 　　3 讨论 　　3.1胎膜早破与细胞凋亡 　　胎膜由胎膜细胞及其所产生的细胞外基质组成，在整个妊娠过程中胎膜的组织结构对维护胎膜的完整性，保证妊娠的顺利发展，防止胎膜早期破裂的发生起着重要的作用。从整个妊娠过程观察，覆盖于子宫颈内口的胎膜组织及其变化是趋向于变薄和弱化，其目的是利于产程的开始[4]。若这个过程加速或程度加重，势必导致胎膜组织结构的改变，当胎膜组织的结构