虾肝肠胞虫LAMP检测方法建立.docVIP

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  • 2018-09-19 发布于福建
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虾肝肠胞虫LAMP检测方法建立

虾肝肠胞虫LAMP检测方法建立   摘 要 为建立一种快速检测虾肝肠胞虫(EHP)的环介导等温扩增方法(LAMP),根据GenBank中登录的EHP-SSU基因序列设计了6条LAMP特异性引物,经反应体系和反应条件的优化,建立了EHP-LAMP检测方法。该方法的检出限为3.71个质粒拷贝/μL;与对虾其他常见病毒病的病原(WSSV、IHHNV、CMNV)均无交叉反应。使用LAMP方法和普通PCR方法对30份具有典型EHP感染症状的对虾样品进行检测,结果显示:LAMP和PCR方法的阳性检出率均为100%。表明建立的EHP-LAMP方法具有高灵敏度、高特异性、高准确度的优点,适用于生产中对虾肝肠胞虫的快速早期诊断,为EHP的防治提供技术支撑。   关键词 对虾;肝肠胞虫;环介导等温扩增;检测   中图分类号:S945.4 文献标志码:B DOI:10.19415/ki.1673-890x.2018.09.058   1 材料与方法   1.1 试验材料和仪器设备   采自天津市东丽区华明街胡张庄村的南美白对虾样品??具有典型的EHP感染症状,经PCR检测并测序后确认为EHP感染,由本实验室保存;经检测未感染EHP的对虾基因组、仅感染对虾白斑病毒(WSSV)的对虾基因组、仅感染对虾皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的对虾基因组、仅感染偷死野田村病毒(CMNV)的对虾RNA

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