背侧抑制性轴突导向蛋白对鸡胚后脑内23c10阳性神经元轴突投射的影响-人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 背侧抑制性轴突导向蛋白对鸡胚后脑内 23C10 阳性神经元轴突投射的影响 摘 要 目的：运用电穿孔质粒转染、活组织离体培养和免疫荧光技术，观察 鸡胚后脑中，背侧抑制性轴突导向蛋白(dorsal repulsive axon guidance protein，draxin) 对 23C10 阳性神经元轴突投射的影响，初步探讨 draxin 在 鸡胚后脑神经元轴突投射过程中的调控作用。 方法：选用正常发育的白来亨鸡受精卵，应用免疫组化方法检测 HH18-19、HH21-22、HH25-26阶段鸡胚后脑内draxin蛋白与23C10阳性神 经元及其轴突的表达分布情况；应用离体活组织切片与draxin-AP融合蛋 白体外共孵育的方法，检测23C10阳性神经元及其轴突是否具有与draxin 蛋白在体外结合的能力；选取HH13-14阶段鸡胚，对后脑区域分别进行跨 膜型draxin、分泌型draxin和空白质粒的电转过表达，通过免疫组织化学 染色方法，观察孵育到HH25-26阶段鸡胚后脑内23C10阳性神经元轴突的 投射情况；选取HH20-21阶段鸡胚，剥离后脑，以含draxin蛋白的条件培 养基进行活组织离体培养，检测draxin对鸡胚后脑神经元轴突生长的影响。 结果： 1 HH18-26发育阶段的鸡胚后脑内，draxin蛋白主要分布在基底节的封 套层内。 2 HH18-26发育阶段的鸡胚后脑内，23C10阳性神经元则在后脑基底 节封套层内形成。 3 23C10阳性神经元及其轴突具有与draxin蛋白在体外直接结合的能 力。 4 跨膜型 draxin 过表达后，有较多 23C10 阳性神经元的轴突异常投射 到同侧后脑背侧部；分泌型 draxin 过表达后，有少部分 23C10 阳性神经 元的轴突异常投射到同侧后脑背侧部。正常鸡胚和空白质粒过表达对照组 均未观察到异常投射的神经元轴突。 5 鸡胚后脑活组织离体培养中，draxin 显著抑制体外培养组织内轴突 的生长，而对照组可见体外培养的组织内有大量轴突形成。 结论： 1 在鸡胚后脑发育过程中，draxin 分布在 23C10 阳性神经元及其轴突 附近；draxin 的表达分布与 23C10 阳性神经元及其轴突的生长发育具有时 间、空间相关性。 2 draxin 与 23C10 阳性神经元及其轴突具有相互结合的能力。 3 draxin 能够从体内、体外两种水平抑制鸡胚后脑神经元轴突的生长。 关键词：背侧抑制性轴突导向蛋白,后脑,23C10 阳性神经元,轴突,鸡胚 英 英 文 摘 要 The effect of draxin on the axon growth of 23C10 positive neurons in chick hindbrain ABSTRACT Objective: Using in ovo electroporation, living tissue in vitro culture and immunofluorescence methods to investigate the role of the repulsive axon guidance protein, draxin, in the development of 23C10 positive neuronal axons in the chick hindbrain. Methods: Fertilized White Leghorn chick eggs were obtained from local commercial sources. Immunohistochemistry at HH18-19、HH21-22、HH25-26 chick hindbrains were used to observe the distribution and development of draxin and 23C10 positive neuronal axon. Draxin-AP fusion protein binding with living sections was used to check whether 23C10 positive neurons can bind draxin in vitro. Immunohistochemistry at HH25-26 chick hindbrain, which were overexpressed by the trans-membrane and secreted draxin plasmid at the