比较携带ido腺病毒转染肝细胞的三种方法-外科学(普外)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………3 英文摘要…………………………………………………………………………………4 前言………………………………………………………………………………………5 材料方法…………………………………………………………………………………7 结果 ……………………………………………………………………………………13 附图 ……………………………………………………………………………………15 讨论 ……………………………………………………………………………………17 结论 ……………………………………………………………………………………22 参考文献 ………………………………………………………………………………23 致谢 ……………………………………………………………………………………26 综述 ……………………………………………………………………………………27 2 比较携带 IDO 腺病毒转染肝细胞的三种方法 摘 要 目 的 ： 研 究 三 种 转 染 途 径 对 携 带 吲 哚 胺 2 ， 3 － 二 氧 化 酶 （indoleaminc2,3-dioxygcnasc,IDO)腺病毒转染小鼠肝细胞的效率，肝细胞活性及 IDO 基因的表达。 方法：用相同量携带 IDO 基因的重组腺病毒通过三种方式转染 BABL/c 小鼠的肝脏，采 用胶原酶在体灌注和离体消化的方法分离小鼠的肝细胞，用台盼蓝拒染法来检测肝细胞 活性，使用 RT-PCR 和 Western Blot 法分别检测转染后的肝细胞内 IDO 基因及其蛋白的 表达。 结果：门静脉灌注加离心法成功分离并纯化肝细胞，肝细胞数量 1.62×108／只。腺病毒 成功转染肝细胞，三组平均转染率分别为：体外培养组 27.298%，肝细胞活性为 79.076%； 门静脉组 24.676%，肝细胞活性为 94.768%；外周静脉组 21.01%，肝细胞活性为 90.812%。 RT-PCR、WestBlot 可以检测到 IDO 基因在肝细胞内成功表达。 结论：经门静脉注射组可获得高转染率，高活性的肝细胞。 关键词：IDO 腺病毒 肝细胞 转染效率 肝细胞活性 3 Compare the three methods with the carried IDO adenoviral transfected liver cells Abstract Objective: To study three kinds of ways of carrying transfected IDO (indoleaminc2 , 3- dioxygcnasc, IDO) adenovirus transfection efficiency of mouse liver cells, liver cells, IDO activity and gene expression. METHODS: The recombinant adenovirus which carrying the same dose IDO transfect the BABL / c mouse liver in three ways .using collagenase perfusion in vivo and in vitro digestion method to isolated mouse liver cells, trypan blue dye assess liver cell activity, and using RT-PCR and Western Blot were detected after transfection of liver cells in IDO gene and protein expression. Results: The portal vein infusion centrifugation can successfully separated and purified liver cells, liver cells 1.62 × 108 / only. Adenovirus can successfully transfected liver cells, the average transfection rate of the three groups were: in vitro group 27.298%, 79.076% activity of liver cells. Portal group 24.676%, 94.768% activity of liver cells. 21.01% of