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藏药材白花刺参抑制NO生成作用谱效相关分析 　　摘要 目的：研究白花刺参HPLC-ELSD的化学指纹与抗一氧化氮（NO）生成作用的相关性，为确定抗炎活性成分推荐质量控制指标提供依据。方法：色谱柱为Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为水-乙腈，梯度洗脱，体积流量为1 mL·min-1；柱温 35 ℃；ELSD漂移管温度为104 ℃；N2气体流速为2.8 L·min-1；进样量10 μL。测定10 批白花刺参的HPLC-ELSD指纹图谱和对脂多糖诱导巨噬细胞生成NO的抑制作用，采用相似度分析和偏最小二乘法对HPLC-ELSD指纹图谱与抗NO生成作用进行相关分析。结果：在10 批药材色谱指纹图谱中，相似度均在0.90 以上，确定15个共有峰，其中7个色谱峰与抗炎活性呈显着正相关，可被选作质量控制指标。结论：该指纹图谱检测方法方便，重复性好，可用于白花刺参药材质量控制和抗炎活性评价的实验依据。 　　关键词 白花刺参；HPLC-ELSD；指纹图谱；相关分析；抗炎活性 　　收稿日期 2012-12-28 　　基金项目 国家科技支撑计划项目（2012BAI27B07）；澳门特别行政区科学技术发展基金项目（073/2011/A3） 　　通信作者 *张志锋，E-mail：zhangzhf99@ 白花刺参是川续断科刺续断属植物白花刺参Morina nepalensis D. Don var. alba （Hand.-Mazz.） Y. C. Tang 的干燥全草，为常用藏药之一，在藏医药典籍《四部医典》、《蓝琉本草》和《宇妥本草》等中均有记载，藏药名为“将刺嘎保”。同时，白花刺参亦是中华人民共和国卫生部药品标准《藏药标准》中刺参的资源植物之一，其性味甘、涩，温；有催吐，健胃功效。主要用于关节痛、小便失禁、腰痛、眩晕及口眼歪斜等；可外用治疖疮、化脓性创伤、肿瘤等[1]。目前对于白花刺参的现代化学及药理活性研究较少，文献报道白花刺参中含有咖啡酰基奎宁酸、三萜皂苷等成分[2-5]。本实验拟采用HPLC-ELSD对白花刺参进行指纹图谱研究，同时利用体外一氧化氮（NO）生成抑制作用实验评价白花刺参抗炎活性，采用偏最小二乘法（partial least squares method，PLS）分析白花刺参指纹图谱与抗炎作用的谱效相关性，为建立白花刺参质量标准提供科学依据。 　　1 材料 　　Agilent 1200高效液相色谱仪；ELSD检测器（美国）；Eclipse XDB C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；Millipore Milli-Q 超纯水机（美国）；METTLER AE240 电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；W201B恒温水浴锅（上海申顺生物科技有限公司）。乙腈为色谱纯（美国fisher公司），其余所用试剂均为分析纯。 　　白花刺参采自四川省甘孜藏族自治州、云南迪庆藏族自治州和阿坝藏、羌族自治州，由四川大学华西药学院张浩教授鉴定，见表1。将药材45 ℃干燥后粉碎，过40目筛，备用。刺参苷J对照品（本实验室自制，经波谱学鉴定和色谱法检测其质量分数在纯度98 %）。 　　RAW264.7 （鼠性巨噬细胞株）购自美国ATCC，本实验室冻存。培养液Gibco DMEM， FBS购自Invitrogen公司，氨基胍，脂多糖（Lipopolysaccharide， LPS），购自Sigma 公司（St. Louis，MO， USA），其他试剂均为国产分析纯。全自动酶标仪WellscanMK-2 （Labsystems公司），CO2恒温培养箱（ThermoFisher Scientific公司），BD 96 孔培养板、培养皿等。 　　2 方法 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为Eclipse XDB柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈（B）-水（A），梯度洗脱（0 ～5 min 75%A，5～15 min 75%～70%A，15～26 min 70%～67%A，26～28 min 67%～61%A，28～45 min 61%～55%A）；体积流量为1 mL·min-1；柱温为30 ℃；漂移管温度为104 ℃；N2气体流速为2.8 L·min-1；进样量为10 μL，样品采集时间为45 min。 　　表1 药材来源 　　Table 1 The spot of sample collection 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取刺参苷J对照品适量，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含刺参苷J 0.285 mg的对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取白花刺参粉末（过4号筛）约1.0 g，精密称定