苯甲醛左氧氟沙星席夫碱诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的分析-护理学专业论文.docxVIP

I I PAGE PAGE IV 摘 要 目的 通过对12种氟喹诺酮衍生物的筛选，选择对人肝癌SMMC-7721细胞增殖有显 著抑制作用的化合物，对其机制进行初步研究，为该类化合物的开发利用提供理论依据。 方法 MTT法检测氟喹诺酮衍生物对细胞的生长抑制作用；Hoechst 33342染色法观 察该化合物诱导SMMC-7721凋亡形态学改变；TUNEL法检测凋亡率；高内涵活细胞成 像法检测线粒体膜电位的变化；Western blotting法检测细胞凋亡信号通路中相关蛋白表 达量的改变，及细胞色素c在线粒体内外的分布。 结果 12种氟喹诺酮化合物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用，结果显 示，M15、M18、M19、M20四种化合物具有显著的细胞增殖抑制作用，其中M18（S） -1，8-（2-甲基亚乙氧基）-6-氟-7-（4-甲基-哌嗪-1-基）-3-[S-苄基硫基-4-(对硝基苯甲叉 基氨基)-1，2，4-均三唑-3-基]-喹啉（1-H）-4-酮在4 μmol/L~32 μmol/L的浓度范围内能 显著抑制肝癌细胞增殖，呈浓度、时间依赖关系。M18作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后IC50值为8.65 μmol/L，48 h的IC50值为5.43 μmol/L，72 h的IC50值约为5.09 μmol/L。左 氧氟沙星盐酸盐作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后IC50值为735.10 μmol/L。M18作用 于骨髓间充质干细胞24 h后IC50值为38.96 μmol/L。Hoechst 33258染色观察细胞凋亡核形 变化，结果显示处理组凋亡细胞明显增多，表现为核边缘化，染色质凝集，细胞核碎裂 等凋亡特征性变化。TUNEL实验结果显示，随着M18作用浓度的增加，凋亡的细胞比率 随之增多，且呈剂量依赖性，与对照组相比均有显著性差异（P0.05）。高内涵活细胞 成像系统检测细胞线粒体膜电位的变化，结果显示，细胞线粒体膜电位降低，处理组线 粒体膜电位降低与对照组比较有统计学差异。Western blotting结果显示，p53、Caspase-3 蛋白表达量高于对照组，Caspase-3活性裂解片段表达量增加；线粒体内细胞色素c显著 减少，胞浆内细胞色素c显著增加。 结论 ① 经改造后的氟喹诺酮衍生物M18显著抑制肿瘤细胞的增殖并对肿瘤细胞 有较好的选择抑制作用。 ② M18诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡，此作用与线粒体凋亡通路有关。 关键词：氟喹诺酮衍生物，人肝癌细胞，凋亡 III III PAGE PAGE IV ABSTRACT Objective: The compounds, which have significant inhibition to the growth of human liver cancer cell (SMMC-7721) line, were chosen by screening 12 kinds of fluoroquinolone derivatives. The preliminary studies on the mechanism of the inhibition of the compound on the growth of human liver cancer cell (SMMC-7721) line were taken to provide the theoretical basis for the further development and utilization of this kind of compounds. Methods: The inhibition of the fluoroquinolone derivatives to the cell growth was measured by the MTT cell proliferation assay; The morphological changes of SMMC-7721 cell apoptosis were detected by Hoechst 33342 staining; The rate of cell apoptosis was detected with TUNEL (terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling) methods; Mitochondrial membrane potential (MMP, △ψm) was measured by high content screening image