丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤自噬的影响及其机制研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不 包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单 位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均 已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读 硕 （博/硕）士学位期间在导师指 导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容 不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规 定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布 学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中 国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数 据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学 位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息 服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。 作者签名： 导师签名： 年 月 日 中文摘要 中文摘要 万方数据 万方数据 丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤自噬的影响及其机制研究 中文摘要 目的：通过丁苯酞、SP600125（JNK 的特异性抑制剂）对缺血 再灌注大鼠模型进行干预，借助 Western blot、HE 染色、TUNEL、 透射电镜等实验方法，探讨丁苯酞对缺血再灌注损伤后自噬的影响 及其与自噬相关蛋白 Beclin-1，LC3-Ⅱ的变化；JNK3 信号通路是否 参与缺血再灌注损伤中自噬的调控；丁苯酞对自噬的影响是否通过 JNK3 信号通路来调控的。 方法：将 100 只（250-300）g 健康雄性 SD 大鼠随机分为五组： 假手术组、模型组、丁苯酞干预组、SP600125 组、丁苯酞+SP600125 组。每组 20 只大鼠。丁苯酞组及丁苯酞+SP600125 组于造模前一星 期开始每天给予 8 mg·mL-1 的 NBP 溶液 1 mL·100 g-1 灌胃；假手术 组、SP600125 组、模型组给予单纯麻油 1 mL·100 g-1。同时 SP600125 组及丁苯酞+SP600125 组予以 SP600125 与 40%PEG400 配成 1mg·mL-1 溶液 1 mL·100 g-1 腹腔注射给药。假手术组、模型组、丁苯酞组予 以同等剂量（40%PEG400）1 mL·100 g-1 腹腔注射。Longa 线栓法制 作大鼠 MCAO 模型缺血 2 小时再灌注 12 小时。使用 Longa 评分法评 价神经功能缺损；分别采用 TTC 染色判断缺血再灌注模型是否成功； HE 染色检测脑组织病理变化；血清 NSE 含量评估脑缺血再灌注损伤 后脑功能的损害；原位末端脱氧核昔酸转移酶标记法（TUNEL）检测 缺血再灌注损伤后 CA1 区神经细胞凋亡与坏死；通过透射电镜观察 缺血再灌注损伤后 CA1 区神经细胞内自噬体形态、数量；Western I 南华大学硕士学位论文 南华大学硕士学位论文 Blot 检测大鼠 CA1 区自噬相关蛋白 Beclin-1，LC3-Ⅱ的表达和 JNK3 信号通路相关蛋白 JNK3，p-JNK 的表达。 结果：1.Longa 评分：(1)首次评分:假手术组未见神经功能缺损 症状。模型组（2.00±0.82）较假手术组（0）明显升高,差异有统 计学意义（p0.05）；NBP 治疗组（1.83±0.50）、SP600125 组（1.88 ±0.52）及 NBP+SP600125 组（1.85±0.41）三组两两比较,差异无 统计学意义（p0.05），但分别与模型组比较，差异均有统计学意 义（p0.05 ）。(2)缺血再灌注 12 小时后评分：模型组（2.65±0.50） 分别与首次评分及假手术组（0）比较均明显升高,差异有统计学意 义（p0.05）；NBP 治疗组（1.53±0.52）、SP600125 组（1.55± 0.43）及 NBP+SP600125 组（1.58±0.55）三组两两比较,差异无统 计学意义（p0.05）,但较模型组及首次评分均明显降低，差异有统 计学意义（p0.05）。 2.TTC 染色：假手术组脑组织染色为鲜红色，模型组、丁苯酞组、 丁苯酞+SP600125 组、SP600125 组均可见皮层及皮层下有明显的白 色梗死灶，各组相对梗死灶体积分别为：模型组（25.56±1.86）较 假手术组（0）比较,差异有统