超声辅助双水相提取艾纳香总黄酮工艺优化及抗氧化活性研究.docVIP

超声辅助双水相提取艾纳香总黄酮工艺优化及抗氧化活性研究 　　摘要：以艾纳香为原料、艾纳香总黄酮得率为指标，采用超声辅助乙醇-硫酸铵双水相体系对艾纳香总黄酮提取工艺进行单因素及Box-Behnken响应曲面试验优化，并用羟自由基清除力、DPPH自由基清除力以及还原力与一般回流提取所得的总黄酮的抗氧化能力进行比较研究。结果表明，艾纳香总黄酮超声辅助双水相提取的最佳工艺条件为超声时间31 min、（NH4）2SO4用量0.4 g/mL、液料比为32 mL ∶1 g，此条件下提取的艾纳香总黄酮得率为（13.31±021）%。对DPPH自由基、羟自由基有较强的清除能力以及较高的还原力，且超声辅助双水相提取的艾纳香总黄酮抗氧化能力显著高于一般回流提取。 　　关键词：艾纳香总黄酮；超声提取；双水相；Box-Behnken响应曲面试验；抗氧化 　　中图分类号： R284.2文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）15-0153-04 　　艾纳香，别称大风叶、大风艾等，为菊科艾纳香属植物艾纳香[Blumea balsamifera （L.） DC]新鲜或干燥地上部分，在我国主要分布于广西、贵州等长江以南地区。其性味辛温，具有温中活血、祛风除湿、杀菌止痒、消炎镇痛等功效。现代临床主要应用于抗菌、杀虫、保肝及降血压、扩张血管、抑制交感神经等[1-2]。主要含有黄酮类、挥发油等成分，其中艾纳香黄酮类成分有抗肿瘤活性、抗氧化活性、抗酪氨酸激酶活性，开发潜力大，市场前景广阔[3]。近年来“绿色化学”“环境友好型”提取工艺备受青睐[4]。超声辅助提取是利用超声波技术强化提取分离过程，能有效地缩短提取时间，提高产品的得率，还可以减少化学与物理危害，提高产品质量[5]。双水相提取是基于乙醇、异丙醇等有机物与无机盐形成的新型双水相体系与传统的双水相体系，根据被分离物质在不同相中分配系数的不同从而实现分离的方法[6-7]。目前醇-盐双水相体系已经被广泛用于提取分离天然小分子化合物，成本低，萃取相不含黏度大、难处理的聚合物，有利于醇类的回收和具有良好的分离性能[8-9]。因此本研究以艾纳香总黄酮提取率为指标，通过单因素及Box-Behnken响应曲面试验进行优化超声辅助双水相提取工艺条件，并用羟自由基清除力、DPPH自由基清除力以及还原力对抗氧化能力进行研究，以期为艾纳香黄酮的药用和食用研究提供一定的参考。 　　1材料与方法 　　1.1材料与试剂 　　1.1.1材料艾纳香叶采自贵州省罗甸艾纳香种植基地。 　　1.1.2试剂无水乙醇、（NH4）2SO4、铁氰化钾、无水Na2CO3等试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），芸香苷标准品（含量≥98%，西安汇林生物科技有限公司）。 　　1.1.3仪器数控超声清洗器（KQ5200DE，昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（FA1004B，上海越平科学仪器有限公司）；旋转蒸发器（上海上天精密仪器有限公司）；紫外-可见分光光度计（UV-2550型，梅特勒-托利多国际股份有限公司）。 　　1.3试验方法 　　1.3.1双水相体系的确定及超声辅助双水相提取艾纳香总黄酮的工艺 　　准确称取一定量艾纳香叶，经40 ℃干燥后粉碎装入三角烧瓶中。加入适量的乙醇-硫酸铵溶液，按试验要求在超声辅助条件下提取艾纳香总黄酮。浸提后以 3 000 r/min 冷冻高速离心20 min。取上清液于40 ℃下真空旋?D蒸发回收溶剂，所得浓缩液真空冷冻干燥，得艾纳香总黄酮提取物。据前期预试验可知，当乙醇体积分数为40%时，（NH4）2SO4用量在0.2～0.6 g /mL 能形成较稳定的双水相体系。因此本试验固定乙醇体积分数为40%进行其他工艺参数的考察。 　　1.3.2标准曲线的绘制 　　精确称取芸香苷标准品，40%乙醇配制得135.0 mg/L的芸香苷储备液。精确吸取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL芸香苷储备液，依次加入40%乙醇4.0 mL、5%亚硝酸钠溶液0.5 mL、10%硝酸铝溶液0.5 mL，摇匀，静置 5 min，最后加入4%氢氧化钠溶液3 mL，乙醇定容至 10 mL。充分摇匀，静置15 min后，509 nm下测定吸光度。得吸光度Y与浓度X（mg/L）的标准回归方程Y=0.101 2X-0000 5，r2=0.999 2。 　　1.3.3单因素考察超声提取工艺 　　本试验针对超声时间（10、20、30、40、50 min）、（NH4）2SO4用量（0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 g/mL）液料比[20 ∶1、25 ∶1、30 ∶1、35 ∶1、40 ∶1（mL ∶g）]3个因素，保持其中2个变量固定不变，对另一个变量进行单因素试验，以艾纳香总黄酮提取率为