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饲粮能量差异对海南猪IGFBP6基因mRNA表达影响 　　摘要：将36头质量为（61.70±1.00） kg的海南猪随机分为2个处理组，分别饲喂高、低能量水平的2种日粮，以研究不同能量水平对IGFBP6基因表达量及生产性能的影响。相比之下，高能量水平饲粮可显著提高海南猪平均日增质量（P0.05）；与料肉比呈显著负相关（P0.05）。饲粮能量水平可影响海南猪的生产性能，但对海南猪IGFBP6基因表达量的影响不显著。 　　关键词：海南猪；能量水平；IGFBP6基因；基因表达 　　中图分类号： S828.5 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0035-03 　　猪生长性状是复杂的数量性状，而营养是除遗传因素外影响生长的另一个重要因素，它虽然无法改变动物的遗传性状，但可通过营养学途径，调控猪生长等数量性状基因的表达，从而在表型上改善胴体品质和肉质。IGFBPs在GH/IGFs生长轴的调节中起着重要作用，这些结合蛋白的作用受营养、生理条件、其他激素等诸多因素的影响。IGFBP6基因作为IGFs超家族中的一员，在成年动物体内广泛表达，因其与 IGF-2 结合的特异性而受到研究者们关注。近几年研究表明，IGF2基因在胎儿生长发育、肌肉生长等方面具有重要调控作用，与猪的生长速度、背膘厚等产肉性状相关[1-4]，是影响动物生长发育的主要候选基因。在IGF依赖型作用途径中，IGFBP6通过与IGF-2的结合对动物的生长发育调节产生重要影响。海南猪是我国地方猪的一个品系，适应性和抗逆性极强，具有肉质细嫩、胴体瘦肉率高、肌纤维特细、肌间脂肪多等优点。迄今，关于IGFBP6对动物生长发育影响的研究尚较少，且主要集中于不同品种猪IGFBP6基因mRNA在不同组织间表达量的研究[5-7]，而关于不同能量水平对猪 IGFBP6 基因mRNA表达量的影响，以及IGFBP6基因mRNA表达量与生产性能相关性的研究尚未见报道。本研究利用RT-PCR技术并结合生长性状，探讨不同能量水平对海南猪IGFBP6基因表达量的影响，以及IGFBP6基因表达量与生长的相关性，以期从分子水平解释营养对生长产生影响的机理。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验设计 　　采用单因子试验设计，将36头质量为（61.70±1.00） kg的海南猪随机分为2个处理组，分别饲喂高、低能量水平的日粮，每个处理组设3个重复，每个重复6头猪。高能量水平日粮参照NRC（1998）《猪营养需要》配制，确定消化能（DE）为14.21 MJ/kg；低能量水平日粮参照NY/T 65―2004《猪饲养标准》配制，确定DE为12.95 MJ/kg，蛋白质含量均为1300%（表1）。 　　1.2 饲养管理 　　按照海南省农业科学院畜牧兽医研究所猪场饲养管理办法进行饲养管理，在7 d预饲期后，对2个处理组分别饲喂高、低营养水平的饲料。试验期用湿拌料，每日喂2次，自由饮水，保持圈舍清洁并定期消毒，正式试验期为40 d。 　　1.3 测定指标 　　1.3.1 生长性能指标 分别于试验开始、结束时空腹称质量，以圈为单位计算日采食量、日增质量、料肉比。 　　1.3.2 样本采集 试验结束时，选取12头质量接近于平均质量的海南猪进行屠宰取样（每重复选2头，每处理组选6头），肉样采集位置为个体的最后肋骨、最后腰椎间的单侧背最长肌，采集后立即置于液氮中速冻并于-70 ℃保存，用于提取肌肉组织总RNA。 　　1.3.3 IGFBP6基因实时定量表达量的测定 取最后肋背最长肌样本约30 mg，加入液氮并研磨成粉，转入1.5 mL Eppendorf管中，采用RNA Simple Total RNA Kit总RNA提取试剂盒提取样本总RNA，按说明书进行操作。通过琼脂糖凝胶电泳检测所提取总RNA的完整性，并通过D260 nm/D280 nm检测样本纯度。采用FastQuant cDNA第一链合成试剂盒（天根公司产品）对总RNA进行反转录（reverse transcription，RT），配制反应体系、设置反应条件、合成cDNA均按说明书进行操作，反转录产物于-20 ℃保存备用。 　　采用Primer primer 5.0软件设计引物，由上海生工有限公司进行合成（表2）。 　　使用实时荧光定量PCR仪，反应体系为20μL：模板 　　1.4 统计与分析 　　采用2-ΔΔCT计算方法分析目的基因的相对表达量。采用SPSS 13.0统计软件对海南猪组织IGFBP6基因相对表达量进行t检验及相关性分析，试验结果用平均数±标准差（x±s）表示。采用LSD法进行平均数之间的多重比较。 　　2 结果与分析 　　2.1 日粮能量水平对海南猪生长性能的影响 　　由表3可知，日粮能量