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食品中合成着色剂测定方法研究――高效液相色谱法 　　摘要 本文建立了应用配有紫外检测器的液相色谱仪检测食品中柠檬黄、日落黄、亮蓝、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、赤藓红、偶氮玉红含量的方法。样品用聚酰胺粉吸附，用甲醇-甲酸溶液淋洗，用乙醇-氨水洗脱，洗脱液收集在蒸发皿中，水浴蒸干定容上机检测。以液相色谱测定，外标法定量。 　　关键词 合成着色剂；高效液相色谱法；LC-UV；吸附；淋洗；洗脱；食品 　　中图分类号 O657.72 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）17-0253-02 　　1 安全提示 　　试验中用到的甲醇、甲酸、氨水具有一定的毒性和腐蚀性，应小心操作，如不慎贱入皮肤、脸部、眼睛等部位，应及时用大量水冲洗。严重者冲洗后就医。 　　2 方法提要 　　本标准操作程序是本实验室参照相关文献样品前处理方法及测定方法，按《残留检测质量控制指南》的有关要求，进行周密验证后，将某些关键步骤进行细化。 　　本标准适用于的合成着色剂为柠檬黄、日落黄、亮蓝、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、赤藓红、偶氮玉红，以下介绍统一用着色剂代替着色剂的名称。 　　3 原理 　　食品中合成着色剂与聚酰胺粉在酸性条件下吸附，在碱性条件下洗脱，经反相液相色谱C18柱分离后，用紫外检测器428、529、600 nm检测，外标法定量[1-2]。 　　4 检测限、线性范围、回收率范围和精密度 　　着色剂检测限为1 mg/kg。着色剂的线性范围：0.50～10.00 μg/mL。着色剂的回收率范围均在75%～110%之间。仪器精密度为1.284%。 　　5 仪器和设备 　　高效液相色谱仪（Waters e2695），带紫外检测器[3]。水浴锅、过滤器、加热板、pH计、烧杯、10 mL比色管、G3砂芯漏斗、抽滤装置、0.45 μm滤膜。 　　6 试剂与溶液 　　除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 　　6.1 试剂 　　甲醇（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯）、聚酰胺粉（过200目筛）、柠檬酸、甲醇（分级纯）、甲酸（分析纯）、乙醇（分析纯）、氨水。 　　6.2 溶液 　　乙酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取1.54 g乙酸铵，加水至1 000 mL定容。 　　甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇（分析纯）60 mL，甲酸40 mL，混匀。 　　乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取乙醇70 mL，氨水20 mL，水10 mL，混匀。 　　pH=4的水：水中加柠檬酸，配合pH测定仪的使用调节至pH=4。 　　6.3 标准物质与标准溶液 　　6.3.1 标准物质。着色剂标准品。 　　6.3.2 标准溶液。①标准储备液配制。准确称取着色剂10 mg，加水溶解并定容至10 mL，溶液浓度为1 000 μg/mL。②标准中间液的配制。使用移液器吸取标准储备液100 μL至10 mL容量瓶中，用水定容至10 mL，溶液浓度为10 μg/mL。③混合标准工作液的配制。标准中间液稀释成标准工作液，浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL。 　　7 试验方法 　　7.1 试样制备 　　①含二氧化碳的汽水：加热除去二氧化碳。②配制酒类：加小碎瓷片数片，加热去除乙醇。③肉类、糖果等含脂类样品：加石油醚除去脂类，重复3次。 　　7.2 分析步骤 　　7.2.1 吸附。称取5 g样品（粉状、肉类、色深样品可少称）于100 mL烧杯中，用pH=4的水溶解。加入2～3勺聚酰胺粉，搅拌片刻，置于60 ℃水浴锅保持30 min，待上层液体澄清即可。 　　7.2.2 淋洗。将吸附好的样品以G3砂芯漏斗抽滤，先用60 ℃pH=4的水洗涤3～5次洗至流出液无色。再用甲醇-甲酸（6+4）溶液淋洗3～5次，洗至流出液无色，然后用大量水洗至中性。 　　7.2.3 洗脱。用乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液洗脱3～5次，每次10 mL，收集洗脱液。 　　7.2.4 蒸发定容。将洗脱液蒸发至接近干燥，加水溶解，定容至10 mL，经0.45 μm滤膜过滤，滤液待高效液相色谱分析。 　　7.2.5 仪器参数与测定条件。①色谱测定条件。色谱柱：SB-C18（粒径5 μm，250 mm×4.6 mm）或同等性能的色谱柱[4]；柱温（35±1）℃；流动相0.02 mol/L乙酸铵溶液、甲醇[5]；流速1.0 mL/min；检测波长428、529、600 nm；进样量10 μL；梯度见表1。 　　7.2.6 仪器测定。①标准曲线的绘制。依据上述条件，将配置好的系列标准溶液，含标准浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL标准溶液，按照从低到高浓度依次进样至液相色谱