黄粉虫蛹超氧化物歧化酶提取及性质研究初报.docVIP

黄粉虫蛹超氧化物歧化酶提取及性质研究初报 　　摘要：以黄粉虫蛹冻干粉为研究材料，获得了一种超氧化物歧化酶(SOD)，PAGE法显示为均一的蛋白谱带。通过在相同时间内，不同pH值、温度对酶的影响，结果表明，意大利蜂蛹中SOD在相同的时间内，pH值为8.35时，有最大的酶活力，pH值高于或低于8.35，酶活力均明显下降；温度在25.5℃左右酶活力最高，40℃时保持活力80%以上，到90℃时没有活力。 　　关键词：黄粉虫蛹；超氧化物歧化酶(SOD)；提取工艺；性质 　　中图分类号：Q554+.9文献标识码：A文章编号：0439-8114(2008)07-0828-02 　　 　　Extraction and Characteristics of SOD from the Pupae of Tenebrio molitor L. 　　 　　DU Kai-shu，L Wen-yan，CHAI Li-ying 　　(Department of Sources and Environment， Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，Henan，China) 　　 　　Abstract： In the paper， freeze-drying pupae of Apis mellifer was used as experimental material based on former studies. The purified superoxide dismutase (SOD) was obtained. The analysis with PAGE electropherogram showed that it was a homogeneous protein. The result of the influence of enzyme at the different pH and temperature at the same time showed that the superoxide dismutase would keep the most activity at pH 8.35， and the activity came down；it kept the most activity at the 25.5℃， remain 80% enzyme activity at the 40℃， but lost activity in the 90℃. 　　Key words： pupae of Tenebrio molitor L.；superoxid dismtase；extraction 　　 　　超氧化物歧化酶(SOD，EC1.15.1.1)是一类催化超氧阴离子自由基(O2-)发生歧化反应的金属酶。根据所含金属离子的不同，可将SOD分为Cu/Zn-SOD，Fe-SOD，Mn-SOD[1]，最近又发现一种Ni-SOD[2，3]。到目前为止，国内外对SOD的分离纯化、生理功能、基因的表达调控、结构研究及其应用已诸多报道，并已从植物、动物、微生物等多种生物材料中分离纯化到超氧化物歧化酶。目前黄粉虫因其含有硒、锌和锰等多种具有抗氧化性的微量元素、维生素及氨基酸，现作为一种资源昆虫得到广泛应用。但究竟是哪些活性物质具有保健作用以及如何发挥作用，到目前还没有统一的结论。因此研究黄粉虫蛹中SOD的性质，有助于深入了解黄粉虫蛹抗氧化和防衰老等作用机理。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　黄粉虫蛹为河南科技学昆虫实验室饲养所得，然后冻干备用。邻苯三酚分析纯为贵州遵义市第三化工厂产品，标准酪蛋白为British Houses Ltd.产品，DEAE-Sepharose和Sephacryl-200为Pharmacia产品，标准分子量蛋白为Pharmacia公司产品。其余产品试剂均为国产分析纯。 　　1.2酶的分离 　　1.2.1酶活力的测定采用改良的邻苯三酚自氧化法[4]。 　　1.2.2蛋白质浓度测定采用Lowry等方法，以酪蛋白为标准[5]。 　　1.2.3SOD的纯化称取6 g黄粉虫蛹冻干粉，按重量∶体积=1∶1的比例加入0.15 mol?L-1NaCl溶液(内含5 mmol?L-1CuCl2)。匀浆后，在15 000 r?min-1、4℃下离心15 min，上清液加入固体(NH4)2SO4至40%饱和度后离心，上清液继续加入固体(NH4)2SO4至60%饱和度，离心，沉淀用少量pH7.6、2.5 mmol?L-1的磷酸钾缓冲液溶解。然后装入透析袋中对重蒸水透析24 h，用聚乙二醇(PEG)浓缩至