黄精根系VA真菌侵染情况及其对黄精生长影响.docVIP

黄精根系VA真菌侵染情况及其对黄精生长影响 　　摘要 采用菌根应用技术，对黄精根系VA真菌的侵染情况及其对黄精生长效应的影响进行研究。结果表明，从黄精根际土壤分离到地球囊霉和摩西球囊霉菌根真菌，土壤含孢量为20.6个/g；黄精根系AM真菌菌丝感染率为17.4%、丛枝感染率为3.1%、泡囊成群分布；孢子接种量不同，黄精生长效应存在差异，说明黄精对VA菌根真菌存在依赖性。 　　关键词 VA菌根；黄精；侵染情况；生长效应；影响 　　中图分类号 S567.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）19-0057-02 　　VA菌根是一种常见的内生菌根，因其菌丝体在胞内呈丛枝状（Arbuscular）和泡囊状（Vese-icular）而得名[1]。由于部分真菌产生丛枝但不产生泡囊，故统称为丛枝菌根（AM）。我国VA菌根真菌广泛存在于各种生态环境中，资源丰富，生态适应性强。其能与绝大多数植物共生，有促进水分和养分吸收利用、提高抗病性、增强耐盐碱和重金属的耐性、提高产量、改善品质，对于实现植物根际土壤生态系统的可持续发展具有重要的实践价值[2]。 　　黄精[Polygonatum cirrhifolium（Wall.）Royle]为百合科黄精属多年生草本植物的干燥根茎。别名老虎姜、鸡头参，始载于《名医别录》，列为上品，黄精味甘，性平。归脾、肺、肾经。具有补气养阴、健脾、润肺、益肾功能。其性平和，作用缓慢，可作久服滋补之品，自古以来一直被视为延年益寿的珍贵中药，是老年人较理想的补养之品。作为传统名贵中药，近年来，由于黄精新药研制和保健品开发，而野生资源缺乏，人工栽培黄精已成为供求主体。本文对黄精根系VA真菌的侵染情况进行研究，观察其对黄精生长的影响。现将试验结果总结如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 供试植物。黄精，采自重庆南川三泉镇境内自然环境生长的新鲜植株，同时采集其根际土壤。由重庆市药物种植研究所提供黄精有性种子。 　　1.1.2 供试菌剂。AM菌剂孢子是课题组采用“湿筛倾析法”分离[3]，在体视显微镜下，从黄精根际土壤0～30 cm深处的土壤中挑取而得。 　　1.1.3 供试土壤。质地为砂壤土，含速效磷3.22 mg/kg、速效氮52.87 mg/kg、有机质2.01%、速效钾104.8 mg/kg、pH值6.7。土壤田间含水量为18%。土壤经高压湿热灭菌（θ=121℃ φ=0.1 MPa）2 h，冷却备用。每钵装2 kg灭菌土。供试盆栽钵为棕色塑料常规盆栽钵。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 黄精AM菌根侵染调查。①根样采集。将根样洗净，将须根先端约1 cm的根段剪下，放入FAA固定液中进行固定，保存备用。②染色制片。根据参考文献[4]中介绍的方法进行制片。③菌根感染率的测定。用测微尺测定感染根段长（含有VA真菌菌丝、泡囊、丛枝、孢子之一者为感染根段）。用Kuwada长度测量软件测量根段长，计算公式[5]如下： 　　菌根感染率（%）=（VA菌根感染根段长÷观察根段长） 　　侵染等级划分标准：菌根侵染率0%～5%为1级；6%～25%为2级；26%～50%为3级；51%～75%为4级；76%～100%为5级。 　　将制片移至Olympus显微镜下进行照相，便于观察清晰的泡囊、菌丝、丛枝、孢子或分枝状吸收结构等，并做好记录。 　　1.2.2 黄精根际土壤AM真菌含孢量测定及分离鉴定。取带根土样进行混合阴干，称取3份各100 g，用湿筛倾析法分离孢子，将获得的湿筛孢子混合物洗入培养皿中，在体视显微镜下统计计数，计算每1 g阴干土中的孢子数量。在解剖显微镜下依据孢子形态、大小及颜色初步归类，将同类孢子用毛细管或粘有水的拔针转移到载玻片上，将孢子调整到最佳位置，再观察孢子的颜色、形状及大小。后加盖玻片将孢子压破，在显微镜下观察孢壁总厚度、连孢菌丝等特征，参照Schenck和Perez（1988）的VA菌根手?越?行分类鉴定。 　　1.2.3 黄精盆栽接种AM真菌对生长效应的影响。将湿筛倾斜法分离提取的真菌孢子，在体视显微镜下挑取细胞质均匀一致的生活AMF孢子，42 kHz超声水浴振荡片刻去掉孢子表面杂物，蒸馏水漂洗数次后，将孢子转入Φ 3.0 cm的小玻璃培养皿中，滴加5%氯化铵T-0.04%链霉素-吐温20液[5]，盖好上皿，孢子表面消毒15 min，灭菌蒸馏水漂洗干净，4 ℃冰箱保存备用。分别采用200、400、800、1 200个AMF孢子接种1 kg土壤，以灭菌土壤不接种作对照（CK），3次重复，每钵播种3粒黄精种子，播期2015年2月10日，播后覆土，灭菌蒸馏水浇透。出苗时定苗1株，常规管理。 　　2 结果与分析 　　2.1 黄精AM菌根形态