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高致病禽流感H5抗体检测存在问题及对策 　　摘 要：禽流感是指由于禽流感病毒导致人与动物共患的一种急性传染病，主要发生在鸡、鸭等禽类中，严重时临床症状表现为全身败血症等。根据禽流感病原体的不同，可分为非致病性、低致病性和高致病性3种类型，其中高致病禽流感发病急、传播速度快、死亡率高，被世界卫生组织列为A类动物疫病。该文通过对高致病禽流感抗体检测过程中存在的问题进行探讨和分析，提出了有利于改善抗体检测的措施，为有效防控高致病禽流感提供参考。 　　关键词：高致病禽流感；抗体检测；问题；措施 　　中图分类号 S858.3 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2015）03-04-120-02 　　禽流感是由于A型流感病毒而导致家禽及野禽出现病症的一种传染病，而高致病性禽流感则是由于A型禽流行性感冒病毒而引起的一种传染病[1]。禽类在感染了禽流感病毒后的症状主要表现为以下2种：一是呼吸道及消化道症状不太严重，死亡率也较低；另一种则极为严重，表现为出现全身性、败血性症状，该病传播速度快，严重时死亡率高达100%，而且可以直接传染人类，致人死亡，给生产造成极大损失和严重危害公共安全。目前，最为有效的防治措施是注射禽流感疫苗，使易感动物体内产生保护性抗体。近年来，通过对高致病性禽流感H5疫苗注射后进行抽样检测发现，多数养殖场免疫后抗体检测合格率普遍偏低。在此背景下，通过对高致病禽流感抗体检测存在的问题进行分析并制定预防措施，对于防控高致病禽流感有着重要意义。 　　1 实验安排 　　养殖条件和养殖量基本相同，试验场地设在广德县张某、杨某2个肉鸡养殖场，由同一防疫队分别进行高致病禽流感H5N1灭活苗免疫，其中对张某养殖场的免疫注射现场安排一个村级防疫员进行现场指导。免疫时间为2012年3月26日，于免疫后21d、25d、30d分别对2个养殖场肉鸡群的抗体水平进行抽样检测。 　　2 试验方法 　　抗体检测方法采用血凝和血凝抑制实验，具体步骤如下：⑴测定抗原效价：在96孔V形微量反应板的1～12孔均加入25μL生理盐水；吸取25μL标准抗原或病毒液加入第1孔，混匀；从第1孔吸取25μL液体加入第2孔，混匀后吸取25μL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第12孔，从第12孔吸取25μL弃之，换滴头；每孔再加入25μL生理盐水；将体积1%的鸡红细胞悬液充分摇匀后，每孔均加入25μL鸡红细胞悬液；微量振荡器上振荡混匀，室温（20～25℃）静置30min后观察结果。对照孔细胞将成明显的钮扣状沉到孔底；将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。判定抗原效价，配制四单位病毒抗原液。（2）测定血清抗体效价：在微量反应板的1～11孔加入25μL生理盐水，第12孔加入50μL生理盐水；吸取25μL血清加入第1孔，充分混匀后吸25μL于第2孔依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μL弃去；1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液25μL，微量振荡，室温静置至少30min每孔加入25μL1%的鸡红细胞悬液混匀，微量振荡30s，室温静置约30min观察结果，红细胞对照孔成明显的纽扣状沉到孔底时即可判定结果。 　　3 试验结果 　　由表1可以看出：在免疫后21d时2个养殖场的抗体检测合格率分别为0和50%，25d时抗体检测合格率分别为30%、70%；30d时抗体检测合格率分别为50%、80%，张某养殖场的合格率一直高于杨某的养殖场。通过20/1000的抽样检测，按照相关标准，抗体检测结果合格率在70%以上视为免疫合格，可知杨某养殖场免疫失败，张某的免疫基本符合要求。 　　表1 不同时间点对2组抗体的检测结果 　　[抗体检测时间（d）＼组别＼抗体检测合格率（%）＼21＼杨某＼0＼张某＼50＼25＼杨某＼30＼张某＼70＼30＼杨某＼50＼张某＼80＼] 　　4 分析与讨论 　　通过上述实例结果可以反映出在肉鸡免疫的过程中存在着多方面的问题[2]，从而造成检测结果不好，免疫失败。笔者现结合日常工作出现的问题作如下分析： 　　4.1 高致病禽流感的流行特点及防控现状 禽流感病毒的宿主多样，不仅对家禽、野禽等禽类具有感染力，而且对猪、马、人也有感染的可能，尤其是高致病性禽流感可以感染人类并造成死亡。目前对该病的主要防控措施是人为的给易感动物进行免疫接种使机体产生抗体，而群体的抗体水平直接影响到免疫接种的效果，与疾病防治的效果有着密不可分的关系。国内外对禽流感抗体进行监测的技术多种多样，主要包括血凝和血凝抑制试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附技术以及RT-PCR等等，其中最为常用的为血凝和血凝抑制试验。然而，近来的报道表明，该病主要易感动物禽类的免疫接种疗效并未取得较好的效果。根据农业部2007年制定的《高致病性禽流感防治技术规范》中规定