黄连上清丸护肝片及牛黄解毒丸对药物代谢酶CYP3A4活性影响.docVIP

黄连上清丸护肝片及牛黄解毒丸对药物代谢酶CYP3A4活性影响 　　【摘要】目的：观察黄连上清丸、护肝片、牛黄解毒丸对CYP3A4活性的影响。方法：利用体外肝微粒体培育体系，以咪达唑仑作为探针底物，研究黄连上清丸、护肝片、牛黄解毒丸对人肝微粒体细胞色素 P450 3A4（CYP3A4）活性的影响。结果：与空白组对比，黄连上清丸、牛黄解毒丸对CYP3A4活性表现为诱导作用，护肝片对CYP3A4活性表现为抑制作用。结论：在与临床上经 CYP3A4代谢的药物联合应用时，应警惕黄连上清丸、护肝片、牛黄解毒丸潜在药物之间的相互作用。 　　【关键词】黄连上清丸；护肝片；牛黄解毒丸；细胞色素 P450 3A4 　　【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）10-0018-03 　　细胞色素P450酶是人体内的肝药酶，广泛分布于肝脏等器官。研究发现，有20多种同工酶与药物代谢相关性高，共同参与人体内300余种药物的代谢[1]。多种药物同时使用时，若其中药物是CYP3A4的诱导剂或抑制剂，则会显著影响合用中其他药物的代谢，也会对其他药物的疗效产生影响。研究表明，多种中药提取物对P450活性有一定影响，如银杏、五味子、白芷、羌活等甲醇提取物对CYP3A4有抑制作用[2-3]。利用体外实验预测药物在体内是否发生药物代谢性相互作用，是药物代谢研究的热点内容。研究黄连上清丸、护肝片、牛黄解毒丸对重组人肝微粒体细胞色素酶rCYP3A4的影响，结果如下。 　　1仪器与材料 　　11仪器MINI-10K微型离心机（常州朗越仪器制造有限公司）；AL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；XH-C旋涡混合器（常州朗越仪器制造有限公司）；DW-86L386立式超低温保存箱（青岛海尔特种电器有限公司）；FE20实验室pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；LC3000高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）。 　　12材料人重组肝细胞微粒体CYP3A4（批号：M41013，SPIBIO产）；咪达唑仑注射液（批号江苏恩华药业股份有限公司；1羟基咪达唑仑（批号：FCerilliant）；卡马西平（批号：100142-201105，中国食品药品检定研究院）；酮康唑（批号：SM0325YF13，上海源叶生物科技有限公司）；NADPH（批号：WO1028EA14，上海源叶生物科技有限公司）。黄连上清丸（批号太极集团重庆桐君阁药厂有限公司）；牛黄解毒丸（批号北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂）；护肝片（批号：201405102，黑龙江葵花药业股份有限公司）。乙腈（批号天津市大茂化学试剂厂）；甲醇（批号广东光华科技股份有限公司）；磷酸氢二钾（批号2，广州化学试剂厂）；三羟甲基氨基甲烷（批号：TA0429CA14，上海源叶生物科技有限公司）；无水氯化镁（批号天津市福晨化学试剂厂）；碳酸氢钠（批号1，广州化学试剂厂）。 　　2实验方法 　　21溶液的配制 　　211咪达唑仑的配制精密吸取咪达唑仑注射液360μl（相当于咪达唑仑18mg），置于5ml容量瓶中，用纯化水定容至刻度，摇匀，得到浓度均为10mmol/l的储备液，置于4℃冰箱备用。精密吸取1ml于10ml容量瓶中，加入纯化水定容至刻度，摇匀，得到浓度为100μmol/l的咪达唑仑溶液。 　　2121-羟基咪达唑仑标准溶液的配制精密吸取100μl 1-羟基咪达唑仑于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，得到1μg/ml的储备液，精密吸取1ml 100μl 1-羟基咪达唑仑储备液于10ml容量瓶中，甲醇定容制刻度，得到100ng/ml的储备液，置于冰箱4℃下保存待用。 　　213卡马西平内标溶液的配制精密称取100mg卡马西平于10ml容量瓶中，用乙腈定容得到1mg/ml的卡马西平储备液，从储备液中精密吸取200μl到10ml容量瓶中，用乙腈定容得到浓度为200μg/ml的内标溶液，4℃下保存备用。 　　214磷酸盐缓冲液（pH74）的配制 取磷酸二氢钾136g，加 01mol/l氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得PBS溶液。 　　215阳性抑制剂酮康唑的配制精密称取酮康唑265mg于5ml容量瓶中，用PBS溶液（pH 74）溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为100mmol/l的储备液，置于4℃冰箱备用。 　　216氯化镁溶液的配制精密称量475mg氯化镁于10ml容量瓶中，用PBS溶液（pH 74）充分溶解，定容摇匀，得到5000mmol/l的氯化