短暂脑缺血再灌流后神经细胞顿抑现象及其机制的研究-神经病学专业论文.docxVIP

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短暂脑缺血再灌流后神经细胞顿抑现象及其机制的研究-神经病学专业论文

短暂发生的氧向自墓的损伤、细胞膜离子通道的功能异常、肌浆网功能障碍职能 星代谢的改变(线粒体功能障得〉句关,还叫能与细胞和 DNA 损伤后所致的细胞 生长周期阻稍等有关 a 脑缺血再灌注后导致了暂位局部脑组织血流量 F降继 而恢复 在此过程中由 1 卜述细胞及亚细胞的变化直接引起缺血神经元的电椅 功状态暂时焰于阀值之下!神纤元的功能一时性缺损!局部 ATP 贮备下降,但受 损古神经细胞出现这种顿抑过程可能代表着细胞依然处于可逆状态 由此J 见 若能在达种短暂但脑缺血发生的刑后阶段应用外源性因素 T 预}迷不同环节!不 仅可能现少在受损r:域内出现的顿抑神经细胞的数日,缩短细胞表现为顿抑过悍 的时间 坯可能及时抢救已顿仰的神经细胞,使之逐步恢复正常功能,蹬免 细胞啤向凋亡 从而起到有效的神经保护作用 e 本研究通过离体的实验模型!采用分子生物学、激光共聚焦显微镜、 X义激光 流式细胞术等多科学科的研究方法和技术!试图在短暂缺血缺钱的神经细胞中寻 找忡经细胞顿抑现象存在的确切依把 军点惊讨这种现象的发生、发展的规律。 我们在同内外首次创新性地提出神经细胞顿抑的系统性假说,而且总过研究 关键环节七的神经保护措施!试图干预神经细胞顿抑的过程及其转归 为短暂性 脑缺血和超早期抬升脑梗塞寻找更合理的治疗配伍方案,提供更襟入的基础理论 依据目 2 气 ,, ,\ 中文摘要 布开究 H 的缸子建市稳定高表达绿色荧光蛋臼 (GFP) 并能这续传代的 PC12而fP细胞株!研究 GFP 表达对转染细胞有无毒性作用 1 摸索在流式细胞仪」 经 G1P/PI 双标分选 GFP 阳件活细胞并分析 GFP 阳性活细胞比例的方法 建扭 暂缺氧血清剥夺/复氧复注血清后的神经细胞顿抑模型 1 研究短暂缺氧血清剥夺咀 氧复注血清后有无神经细胞顿抑现象存在及顿抑现象与他最代谢的关系及环抱菌 素 A 对短暂峻氧血清剥夺/复氧复注血泊后的神经细胞的保护作用 探讨神经细胞 顿抑发牛的叮能机制及干预措施. (方法 1 用脂质4年转染法将 pEGFP-N! 质粒转入 PC12 细胞1经过 G41 筛选和克隆转移! 在荧光显微镜下观察转染细胞荧光表达 3 通过比较普通 PC12 细胞和 PC12!GFP 细胞的形态 细胞活件、细胞闲期、细胞的冻存与复苏及加入神经生长阴子 (NGF) 后有无神经样突起长出等,迸 步对 PCI 2}GFP 细胞株进行鉴定并研 究 GFP 表达对转杂细胞有无毒快作用, 2 将缺氧血清剥夺/复氧复注血清后的 PCI 2}GFP 细胞进行 PI 标记 标记成功后 在流式细胞仪上分选 GFP 阳性活细胞并分析 GFP 阳性活细胞比例 分逃出 GFP(+)IPI(-}、GFP(+)IPI(+) ,GFP( 阳气(-), GFP(-}IPI(+ }4组细胞!在倒置显微 镜不观察分边后各组细胞形态并在激光共聚焦显微镜下照相. 3 i夺纲胞随机分为对照组和缺氧组!在流式细胞仪 t分别测定缺氧血清剥夺喔氧 复注血清后不同时间点细胞饲亡率和细胞坏死率。 4 将细胞随机分为对熙、组、缺氧组和干预组,研究短暂缺氧血清剥夺/复氧复注血 清后及用环抱菌素 A 干预后不同时问点的 ATP 含量〈生化发光法〉、细胞活性 (MTT 法 λ 线粒体膜电位( Rboda.mine123 标厄 流式细胞仪测定)的 动态变化. 结果 3 I 转染 pEGFP-N 1 质和的 PCl2 细胞 4 天后大部分死亡, 1 月后在炎光也微镜下观 察见散在困状荧光,经克降转移和继续用 0418 筛选后几乎所有细胞见荧光表达! 并可连续稳定传 40 代以上!且荧光强度元明思变化。与普通 PC12 细胞相比! 除 P 二 12的FP 细胞体积较 PCI2 细胞略大外,实形念结构无明显差异。细胞冻行 亏复苏的特性以及加 NGF 后分化成交感神经细胞的功能王明显差异。细胞活性 及细胞周期中各期细胞比例无显著性差异 (PO.05) 2 在流式细胞仪土纷 GFPIl詹 l 双标可分选 H出II GF贝P(I)IPI(-) ,GF叹P C川)!JI( GFP町(-)m阳叹( )弘 GF贝F 气川H盯+凋甘细胞@ 3 正常对照组与缺氧血清剥夺 15min、3Om in. lh 再复注血指复氧 lh 纽栩比细胞 刷了二率尤显著性差异 (PO.05) ,且缺氧血清剥夺15min 再复注血泊复氧 lh 组与 E常组样本均数美最小:缺氧血清剥.{f 15min. 30min 再复片血清复氧 lh 组与正 常对照织相比坏死率元显著性差异 (PO.05) ,且缺氧血清剥守15min 冉复泣巾 清复钱 lh 组与正常组样本均数羌最小 4 与正常对照组榈比,缺氧血情剥夺 15 分钟再复

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