第3章 培养基课件.pptVIP

3. 培养基的选择 3.1常规选择法 （1）基本培养基 根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。 （2）培养基中各种激素的浓度及相对比例 步骤：查阅资料→设计实验（将每一种拟使用的激素选择3～5个水平，再按随机组合的方式建立实验方案，如表2－2两种激素4种浓度的组合实验，然后再进行第二次激素配比实验表2－3）。 2mg/L 4mg/L 6mg/L 8mg/L 0.1mg/L 1 2 3 4 0.2mg/L 5 6 7 8 0.3mg/L 9 10 11 12 0.4mg/L 13 14 15 16 培 养 基 编 号 6－BA NAA 表2－2 两种激素4种浓度的组合实验 3mg/L 3.5mg/L 4mg/L 4.5mg/L 5mg/L 0.1mg/L 1 2 3 4 5 0.15mg/L 6 7 8 9 10 0.2mg/L 11 12 13 14 15 0.25mg/L 16 17 18 19 20 0.3mg/L 21 22 23 24 25 序 号 6－BA NAA 表2－3 第二次激素配比实验 3.2 “广谱实验法” 在广谱实验法中，把培养基中的所有组分分为4大类：无机盐、生长素、细胞分裂素和有机营养物质（蔗糖、氨基酸和肌醇等）。对每一类物质再选定3个浓度，即低(L)，中(M)和高(H)(见教材p37)。4类物质各3种浓度的各种不同组合即构成了一项包括81个处理的实验。每一处理可用4个字母来表示。然后再试验不同类型的生长素和细胞分裂素，以找到它们的最好类型。 第3章 培养基 1. 培养基的种类及特点 常见培养基有MS培养基（Murashige和Skoog，1962）、改良White培养基（ White，1963）、Miller培养基（1963）、Heller培养基（1953）、LS培养基（Linsmaier和Skoog，1965）、 ER培养基（Eriksson，1965）、 B5培养基（Gamborg等，1968） SH培养基（Schenk和Hidebrandt，19720 、Nitsch培养基（Nitsch,1969）、N6培养基（朱至清等，1974）等（表3－1）。 表3－1 常用的培养基配方 成分 培养基（单位：mg/L） White 改良White MS B5 N6 NH4NO3 — — 1650 — — KNO3 80 80 1900 2500 2830 CaCl2·2H2O — — 440 150 166 MgSO4·7H2O 750 720 370 250 185 KH2PO4 — — 170 — 400 (NH4)2SO4 — — — 134 463 Ca(NO3)2·4H2O 300 300 — — — Na2SO4 200 200 — — — NaH2PO4·H2O 19 16.5 — 150 — KCl 65 65 — — — KI 0.75 — 0.83 0.75 0.8 H3BO3 1.5 1.5 6.2 3 1.6 MnSO4·4H2O 5 7 22.3 — 4.4 续表3－1 常用的培养基配方 成分 培养基（单位：mg/L） White 改良White MS B5 N6 MnSO4·H2O — — — 10 — ZnSO4·7H2O 3 3 8.6 2 1.5 Na2MoO4·2H2O — — 0.25 0.25 — MoO3 0.001 0.0001 — — — CuSO4·5H2O 0.01 0.001 0.025 0.025 — CoCl2·6H2O — — 0.025 0.025 — Fe2(SO4)3 2.5 2.5 — — — FeSO4·7H2O — — 27.8 — 27.8 Na2·EDTA·2H2O — — 37.3 — 37.3 NaFe·(EDTA)2 — — — 28 — 续表3－1 常用的培养基配方 成分 培养基（单位：mg/L） White 改良White MS B5 N6 肌醇 — 100 100 100 — 烟酸 0.05 0.3 0.5 1 0.5 盐酸吡哆醇 0.01 0.1 0.5 1 0.5 盐酸硫胺素 0.01 0.1 0.1 10 1 甘氨酸 3 3 2 — 2 蔗糖 2% 2% 3% 2% 5% MS培养基是1962年Murashige和Skoog为培养烟草材料而设计的。特点是无机盐的浓度高，有加速愈伤组织生长的作用，能满足植物组织对矿质营养的要求。铵盐和硝酸盐含量高，比例也比较适合，也不需要添加更多的有机附加物，这是目前应用最广泛的一种培养基。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求较低的植物，尤其不适合铵盐过高易发生毒害的植物。与MS培养基较为接近的还有LS培养基（Linsmaier和Skoog，1965