发酵工程技术第四章 工业发酵灭菌.ppt

一般介质 深度过滤介质 滤器形式 纤维介质过滤器、粉末烧结金属过滤器、薄膜空气过滤器 介质过滤器除菌的机制 重力沉降：可以忽略 惯性冲击：空气流速大时，起主导作用 拦截：空气流速小时，起主导作用 扩散：布朗运动 4. 空气过滤除菌流程 （1）空气除菌流程的要求 空气应具有一定的压力，过滤器要高效，设备尽量采用新技术，流程尽可能简化，降低动力消耗，工人操作简便，运转费用低。设备中要用无油润滑，否则有油雾，影响过滤效率。 （2）流程分析 空压机→冷却→分油水→总过滤器→分过滤器 1、高空采风、两次冷却、两次分油水、适当加热流程  特点 ：两次冷却、两次分油水、适当加热。空气第一次冷却到30～35℃，第二级冷却至20～25℃，经分水后加热到30～35℃，因为温度升高，相对湿度下降。 2、冷热空气直接混合式空气除菌流程 特点 ：省去一级冷却和分离设备及空气再加热设备，简化了流程，使冷却水用量也降低了。压缩空气从贮罐出来分两路，一部分进冷却器，经分离器分离水、油雾后与另一部分未处理过的高温压缩空气混合，使混合后的空气温度为30～35℃，相对湿度为50～60%。 3、高效前置过滤除菌流程 在压缩机前设置一台高效过滤器，这样便可降低过滤器负荷（即多次过滤），达到空气除菌的要求。 冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 （发酵部分） 1） 每次发酵前必须进行一次空罐灭菌。 2 ）发酵用GMD培养基，用蒸馏水配制，其中不含有任何抗生素，配制后进行实罐灭菌。 3） 发酵温度为36.5±0.1℃，根据工程菌生长情况到后期可适当调整温度，并作必要的培养基成分添加，发酵时间根据工程菌生长情况确定。发酵结束时放出菌液，发酵灌应再进行一次灭菌并清洗。 思考题 1. 实罐灭菌和空罐灭菌的异同？ 2.连续灭菌与分批灭菌的比较？ 3.进行发酵生产时，对设备进行空消后为何要待灭菌培养基输入罐内，才可以冷却，而不能立即冷却？ * * * * * 第一节灭菌的概念和必要性 灭菌：是指用物理或化学因子杀灭有生活 能力的细菌营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒：用物理或化学方法消除物料、容器、器皿内外的病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。 工程上灭菌：是指使用物理或化学方法将培养基中的杂菌的细胞和孢子杀灭至不影响发酵为限。灭菌是为了保证进行纯培养（纯种）发酵。如有杂菌，可引起以下的后果：①生产菌和杂菌同时在培养基中生长，结果丧失了生产能力。②杂菌的生长速度有时比生产菌生长得快，结果使反应器中以杂菌为主。③杂菌会污染最终产品。④杂菌所产生的物质，使提取产物时发生困难。⑤杂菌降解所需要的产物。⑥发酵如污染了噬菌体，可使生产菌株发生溶菌现象。 发酵的一般流程 种子扩大培养 培养基配制 空气除菌 培养基灭菌 发酵生产 下游处理 发酵设备 培养基灭菌 设备灭菌 好氧培养中空气灭菌 培养过程中加入的物料要灭菌 使用无污染的纯种 设备严密，罐内保持正压 工业上采取的措施 1. 加热灭菌火焰灭菌、干热灭菌、湿热灭菌 2. 射线灭菌紫外线、阴极射线、X射线、γ射线 3. 化学药剂灭菌0.%~0.25%KMnO4溶液、0.5%~1%漂白粉溶液、75%酒精、0.25%新洁尔灭、10%甲醛溶液、苯酚溶液、来苏尔 4.臭氧灭菌 5.过滤除菌 第二节 灭菌的方法 　 项目 　方法 本质 优点 缺点 化学物质灭菌 化学反应 简单 不适合 培养基灭菌 辐射灭菌 紫外线与菌体核酸的光化学反应；其它射线使水分子产生自由基 紫外线应用广泛 Ｘ-射线不经济，不安全 干热灭菌 加速与温度有关的胞内反应 湿热灭菌 蒸汽释出潜热使蛋白变性 经济快速适用范围广 臭氧灭菌 氧化作用 安全高效 过滤灭菌 利用菌体物理性质 可用于热敏物质 2.灭菌方法： 工业上培养基灭菌使用的方法是湿热灭菌。 湿热灭菌简便、有效、经济。 一、工业上培养基灭菌 1.培养基灭菌的目的： 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 3.培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度； （2）尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基 组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。 灭菌温度的选择应考虑的因素主要有： a.微生物的热致死温度，应高于该温度。通常以芽孢为准。 b.营养成分的破坏，灭菌的过程实质上也是营养成分破环的过程 因此，灭菌温度的选择，应是在保证灭菌效果的前提下，尽可能减少培养基中营养成分的破坏。 4.培养基灭菌的操作 （一）实验室种子培养基灭菌方法 使用高压蒸汽灭菌锅??