发光菌微毒检测和彗星试验对某地区饮用水毒性研究.docVIP

发光菌微毒检测和彗星试验对某地区饮用水毒性研究 　　摘要：对A地区水源水以及经过处理的出厂水和用户用水进行了生物毒性探索，发光菌微毒检测和彗星试验均显示该地区水源水具有明显的综合毒性和致突变性,经过水厂工艺处理之后的水质得到明显改善。出厂水中与到达用户的用水仍然具有一定的毒性,这与工艺处理的反应副产物有明显的关系。但是水样的常规理化检测指标并未显示任何超标现象,因此,仅靠理化检测手段是不能保证水质安全性,将生物监测技术加入水质评价体系中成为必要。 　　关键词：发光细菌；彗星试验；光损失值；DNA损伤 　　收稿日期：2011-05-07 　　作者简介：刘殿勇（1976―），男，山东济宁人，工程师，主要从事环境保护工作。 　　中图分类号：X701 　　文献标识码：A 　　文章编号：1674-9944（2011）06-0068-03 　　1 引言 　　研究表明世界上80%的疾病与饮水有关,人们的生活又离不开水,水质的好坏直接影响人类的健康,因此,人们对饮用水水质提出了更高的要求［1］。而大多的水质监测仅从浓度水平上对水质的好坏进行评价,但是,一些低浓度的污染物存在于水中仍能给饮用者带来了健康威胁。这些痕量污染物本身具有长期残留性、生物积累性、半挥发性和高毒性等性质。它们随人类活动进入到环境当中,并沿着食物链浓缩放大,对人类的健康产生危害［2,3］。通过其在环境中的迁移、转化和富集,浓度水平可提高数倍甚至上百倍。大量的动物实验研究和某些癌症的发病率及其病原学关系的调查分析进一步表明饮用水中很多污染物是多种癌症的致癌因子,并且已有的研究证明了进入水体中的种类繁多的有机物绝大部分对人体有急性或慢性、直接或间接的致变作用［2］。 　　发光细菌检测法是一种简单快速的生物毒性检测方法,它不仅能够对单因子指标进行测试,更能快速准确地对环境的综合毒性指标进行检测,具有理化法无可比拟的特点［4］。彗星实验是监测水中污染物是否具有潜在诱变性的短期实验技术之一,不仅可以对活细胞,而且可以对死细胞的DNA损伤进行分析,适于体内体外和各种细胞的DNA损伤的研究［5］。本文采用发光细菌微毒检测试验和彗星试验对A地区的水源水及其经过处理后的水样进行综合毒性和致突变性研究。 　　2 材料与方法 　　2.1 水样采集和预处理 　　在2010年1月份分别对A地某水厂的进厂水、出厂水以及用户的龙头出水进行水样采集。 　　水样经装有预处理过的大孔树脂XAD-2和XAD-7的层析柱安装在自制富集装置上进行有机物富集,流速控制在40mL/min；水样过柱完毕后,取下层析柱用二氯甲烷进行洗脱,收集洗脱液,加入无水硫酸钠进行脱水处理；采用氮吹法在40℃水浴环境下对洗脱液吹干至恒重,残渣用二甲基亚砜复溶并定容。设定3个浓度分别为:高浓度10L/mL（10 L水中的有机物浓缩至1mL二甲基亚砜中）、中浓度 4L/mL和低浓度2L/mL。 　　2.2 试验生物体 　　2.2.1 发光菌菌种培养 　　用复苏稀释液对淡水发光菌-青海弧菌（Q67）冻干粉进行复苏培养10min,用接种环蘸取菌种在LB固体培养基平板上划线,倒置放于恒温培养箱中,于22℃培养24h,再将一定数量的单菌落菌种接种到定量的液体LB培养基中,22℃振荡培养16～24h,分装成甘油管-70℃保存。试验时,取出甘油管,分别在LB固体培养基和液体培养基中培养后,制备菌悬液,取一定量含有发光菌的液体培养基在4 000r/min的离心条件下进行离心分离,再用无菌生理盐水进行悬浮,调节菌悬液的OD值以保证发光菌数量密度。 　　2.2.2 彗星试验动物分组与染毒 　　选用SPF级昆明种雌性小白鼠为实验动物,SPF级昆明种雌性小白鼠,年龄为5周,体重分别为18～22g左右。每一组喂养老鼠3只,按照0.01mL每克每天的染毒剂量将3个浓度的有机提取物给予各组小鼠,并以二甲基亚砜为阴性对照,连续染毒5d后,断颈处死小鼠,取肝脏进行试验。 　　3 检测方法与分析 　　3.1 发光菌微毒检测 　　将准备好的菌悬液与水样以1:1的比例进行混合,菌种的接触反应时间统一控制在10min,反应10min后进行发光量的测定。每个水样做3个平行,并以去离子水作阴性对照。 　　光损失值（A） 　　（阴性对照管的发光度-样品管的发光度）/阴性对照管的发光度×100%。 　　并采用SPSS进行数据分析,以平均值±误差代表该水样的毒性。 　　3.2 致突变性检测 　　用专用眼科剪将脾脏样做剪碎处理,放入PBS缓冲液中进行悬浮后混匀,过200目筛得到均匀的细胞悬浮液。参照文献的方法［6,7］,制备“三明治”式胶片,并依次对胶片进行裂解、解旋、电泳、中和及脱水处理。再用溴化乙锭染色在荧光显微镜下观察,每一样本随