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葛枣猕猴桃总酚含量和PPO活性研究 　　摘要：采用葛枣猕猴桃嫩枝和叶柄为供试材料，分析总酚含量和多酚氧化酶（PPO）活性及其变化规律。研究结果显示，葛枣猕猴桃PPO活性的最适pH值为7.0；最佳底物为邻苯二酚，且浓度为0.18mol·L-1；最佳温度为25℃。葛枣猕猴桃PPO活性在花果期明显高于花前期，葛枣猕猴桃总酚含量在每年的4月、5月、9月3个时段最低。 　　关键词：葛枣猕猴桃；多酚氧化酶活性；总酚含量 　　中图分类号：TS2文献标识码：Ａ 　　猕猴桃（Actinidia）是重要的经济植物，中国是其起源和分布中心，种质资源极为丰富［1］。同时，猕猴桃也是20世纪野生果树人工驯化栽培最有成就的4大果种之一［2］。由于其风味独特，各种营养丰富，维生素C含量高，经济、营养价值高和医疗效果显著而倍受关注。猕猴桃作为中华的一种传统植物，其全株均可入药，中医认为其果能调理中气、通淋、解热除烦、生津润燥，味酸、甘、性寒，在治疗食欲不振、消化不良、呕吐、烧烫伤上均有疗效，其根能活血消肿、祛风利、湿清热解毒，味苦、涩，性寒，在治疗风湿性关节炎、水肿、跌打损伤、痢疾等疗效不错［3］。葛枣猕猴桃（A.polygama）是猕猴桃中很有特色的一种小果型猕猴桃，具有很好的开发价值。分布于海拔1　000～2　800m的范围，落叶木质藤本果树。二年生枝深褐色，光滑无毛，细硬，皮孔密、小，圆形，灰白色。髓实心，白色。一年生枝细，硬，褐色，光滑无毛，皮孔较密，圆形，呈白色。节间长2.4～4.6cm。叶薄纸质，近圆形，长约7.1～10.7cm，宽4.6～8.9cm，基部平截、对称，先端渐尖，尾尖短，叶面绿色，无毛，主、侧脉不明显，无毛，叶缘锯齿小，刺状，浅红色，叶背绿色无毛。叶柄长2.5～3.3cm，呈绿色。果实近长扁椭圆形，单果重约9g，果皮绿色，被白粉，光滑无毛，果顶钝尖圆，具喙，较长，果肉黄色，多汁，果熟期在当地9月中下旬至10月初。 　　葛枣猕猴桃是研究猕猴桃属系统遗传发育必不可少的一种珍贵材料。该种群分布范围相对较窄，且现存的野生植株数量不多，野生资源在野外很难发现，偶尔能发现几株或十数株。因此，葛枣猕猴桃需要着重加强保护。而进行人工无性繁殖是扩大其种群数量、加强保护的唯一途径。其中，总酚含量及多酚氧化酶（PPO）活性等指标与植物生长时期密切相关［4，5］，也是无性繁殖材料中影响成活的关键。通过葛枣猕猴桃总酚含量和多酚氧化酶活性及其变化规律的研究，可以更有效率地指导无性繁殖的取材，提高繁殖成活率，扩大种群数量，保护该种群。 　　１材料与方法 　　1.1材料 　　取葛枣猕猴桃叶柄和嫩枝条作为实验供试材料，测定正常葛枣猕猴桃植株在一年内各月的总酚含量与多酚氧化酶活性动态变化情况。 　　1.2葛枣猕猴桃多酚氧化酶活性测定 　　1.2.1酶液制备 　　取葛枣猕猴桃嫩茎段总质量剪碎2.0g，加入少许石英砂以及PVP粉0.02g，再吸取10mL磷酸缓冲液（0.1mol·L－１pH7.0）加入并置于冰浴中混匀，然后以10　000rpm离心20分钟。取上层上清液转入到标准容积为25mL容量瓶，下层的沉淀再以磷酸缓冲液5mL重新提取1次，最后将沉淀中提取的上清液也并入容量瓶中，并定容容量瓶备用。 　　1.2.2酶活力计算与酶活性测定 　　酶活力是以每克新鲜样品、每分钟的光密度即相应的光吸收值的每增加0.01为1个酶活性单位U。从瓶中制备的酶液中取0.2mL加入试管中，再加入0.1mol·L－１pH7.0磷酸缓冲液3mL并缓慢摇匀，置于恒温水浴锅中，25℃水浴10min。然后加入0.5mL邻苯二酚（0.1mol·L－１），立即通过分光光度计测定470nm波长下的OD值，并用磷酸缓冲液（0.1mol·L－１，pH7.0）作为空白对照，记录读数，30秒/共记录5次。酶活力计算公式为：U=ΔOD/0.01×t×W其中，W为供试样品的鲜重。 　　1.2.3筛选最适测定条件 　　1.2.3.1葛枣猕猴桃多酚氧化酶活性与pH值 　　分别设置缓冲液的不同pH值5.0，6.0，7.0，8.0，并用于提取葛枣猕猴桃多酚氧化酶，并利用邻苯二酚（0.1mol·L－１）测定其活性。酶活力作为纵坐标，提取缓冲液的pH值作为横坐标，观察并确定其最适pH值，利用测定值形成酶活力与pH曲线。 　　1.2.3.2不同底物及浓度对的影响 　　根据生物酶活性测定体系，通过实验设计并配制浓度梯度为0.02mol·L－１，0.06mol·L－１，0.12mol·L－１，0.18mol·L－１，0.20mol·L－１，0.24mol·L－１的邻苯二酚溶液以及阿魏酸溶液、肉桂酸溶液，测定葛枣猕猴桃多酚氧化酶在不同浓度及底物下的活性情况，观察并发现其最佳底物与浓度。 　　1.2