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中国人群运动性猝死相关基因快速检测的方法的研究 　　摘要：目的 建立一种中国人群运动性猝死相关基因多态性速测方法。方法 用Chelex法提取外周静脉血基因组DNA，应用定点突变技术获得运动性猝死相关基因的突变阳性DNA模板，然后通过等位基因特异性（allele-specific， AS）PCR法扩增目的基因。优化内参引物、多态引物的Tm值，引物浓度比例，PCR循环数等扩增条件；琼脂糖凝胶电泳进行基因分型。结果 AS-PCR可检测运动性猝死相关基因多态性，PCR产物琼脂糖凝胶分型与DNA测序结果完全一致。结论 本研究建立的AS-PCR方法适用于中国人群运动性猝死相关基因的快速检测。 　　关键词：运动性猝死；基因多态性；等位基因特异性PCR 　　中图分类号：G804.83 　　Abstract：Objective To establish a simple method for testing exercise sudden death gene of Chinese. Methods Firstly， extract genomic DNA from peripheral venous blood. Secondly， use fixed point mutation technique to get the positive template， and then use the allele specific （allele specific， AS） PCR to amply the target gene. Thirdly， optimize the Tm value and concentration ratio of primers， PCR cycle number and a series of amplification conditions. Finally， analyze the PCR product by agarose gel electrophoresis and sequencing. Results The AS-PCR can detect sudden cardiac death gene polymorphism， the agarose gel electrophoresis genotyping results of PCR product coincide exactly with the result of DNA sequencing .Conclusion This new method established and optimized can be used for rapid detection of exercise sudden death related genes. 　　Key words：Exercise sudden death；Genetic polymorphism；Allele specific PCR 　　近年来，高强度竞技体育运动项目（如足球、马拉松）运动性猝死案例频发，并且其数量呈逐年上升的态势。目前，临床对运动性猝死的常规检测手段主要有家族史、个人史筛查，体格及心电图检查，若为阳性结果，则进一步查超声心动图、运动负荷试验和24h动态心电图等[1]。但这些检测方法针对性不强，检出率低，具有较大的局限性。国内外对运动性猝死的研究表明[2]，死者的某些基因存在突变，大多表现为SNP或碱基缺失多态性。 　　在离子通道基因突变导致运动性猝死方面的研究，国内外均有相关报道，并初步确定了运动性猝死相关基因及其突变位点[3]。钠离子通道是一种跨膜糖蛋白，位于细胞质膜上， 由A、B亚单位组成，主要选择性允许钠离子通过， 维持细胞兴奋性及其传导[4]。编码钠离子通道的基因突变会导致其相应的通道蛋白结构与功能异常， 从而引发一类心律失常疾病[5]。钾离子通道是亚型最多、作用最复杂的一类离子通道。编码钾离子通道的基因突变导致的钾通道功能异常可以导致多种心律失常综合症[6]。国内外文献报道研究较多的钾离子通道基因有KCNE1，KCNH2，KCNJ11。KCNE1基因编码人类心肌缓慢激活的延迟整流性钾通道蛋白的B亚单位，该通道在心肌动作电位复极期起重要作用[7]。有文献报道[8]，中国汉族人群中广泛存在KCNE1-S38G 多态性改变，KCNE1―38S 型可能与室性心动过速发病相关。Jeron等[9]发现在AMI并发猝死患者的KCNJ11基因上出现2个错义突变（ P266T和R371H）， 这2个突变导致了氨基酸序列的改变， 诱发折返性心律失常。CACNA1C和CACNB2B是编码钙离子通道的基因，体外实验证明这两个基因的突变导致L型钙通道功能获得性突变，