变应性鼻炎大鼠血清内源性H2S及NO表达水平变化的研究.docVIP

变应性鼻炎大鼠血清内源性H2S及NO表达水平变化的研究 　　[摘要] 目的 观察变态反应性鼻炎SD大鼠血清内源性硫化氢(H2S)、一氧化氮(NO)表达水平变化,并探讨其意义。方法 20SD大鼠只随机分为空白对照组、模型组,用甲苯-2,4-二异氰酸酯建立变应性鼻炎大鼠模型,用敏感硫电极法检测血清H2S水平,酶法检测血清一氧化氮水平,进行对比分析。结果 对照组血清内源性H2S:3.01μmol/L,NO:38.4μmol/L,模型组血清内源性H2S:4.25μmol/L,NO:46.2μmol/L,对照组低于模型组,具有统计学意义(P0.05)。结论 变态反应性鼻炎大鼠血清内源性H2S、NO表达水平增高,可能对鼻粘膜的变态反应性炎症起到调节作用,起到保护鼻粘膜的作用。 　　[关键词] 硫化氢;一氧化氮;变应性鼻炎 　　[中图分类号] R765.22[中图分类号] A[文章编号] 1673-9701(2009)24-47-02 　　 　　H2S和NO是机体内正常表达的气体信号分子,具有广泛的生理作用,并对机体免疫功能,炎症反应等具有调节作用,有研究表明[1],在变态反应性鼻炎时NO及INOS表达会发生改变,参与变态反应性鼻炎的发病及调节,本文就变态反应性鼻炎大鼠血清H2S和NO表达水平变化进行研究,并探讨其机制及意义。 　　 　　1资料与方法 　　 　　1.1主要仪器及试剂 　　甲苯-2,4-二异氰酸酯(Toluene 2, 4-diisocyanate, 2, 4- TDI)(美国Sigma公司),橄榄油(中国医药集团上海试剂公司),水合氯醛(北京化学试剂公司),721型分光光度计(上海精密仪器仪表有限公司),敏感硫电极(PAG/SI上海雷磁),离心机3K30型(德国Sigma公司),硫氢化钠(南京建成生物工程研究所),抗坏血酸南京建成生物工程研究所),乙二胺四乙酸(南京建成生物工程研究所)。 　　1.2实验动物分组与模型建立 　　30只健康SD大鼠,(购自郑州大学医学院实验动物中心)6～8周龄,体重(200±25)g,雄性,随机数字表发分为两组,对照组、造模组,用橄榄油将2,4-TDI配成浓度为10%溶液作为致敏剂滴鼻,每侧5μL,每日1次,共致敏7次。此后每2日1次,共致敏4次,致敏时间共15d。从第1次给药开始记录鼻部症状如鼻痒(致敏动物用前爪抓鼻)、喷嚏、清涕,评分,叠加分数,记总分。总分超过5分者模型成功,②激发:致敏结束、模型成功后每2天用10% 2,4-TDI溶液滴鼻,激发1次,维持症状。鼻部症状评分标准[2]:①鼻痒:轻度,轻擦鼻几次,1分;重度,抓挠鼻、面不止,到处擦磨,2分;②喷嚏:1～3个1分,4～10个2分,11个以上3分;③流清涕:流至前鼻孔1分,超过前鼻孔2分,流涕满面3分。对照组给药方法,药品为单纯橄榄油。 　　1.3标本采集 　　最后一次激发24h后腹腔注射10%水合氯醛(0.6g/kg)麻醉小鼠,麻醉后经中线无菌开胸,剪开心包膜,打开心脏,取血2mL,于4℃2000r/min低温离心10min,取血清保存于-70℃深低温冰箱待测。 　　1.4血清内源性H2S检测 　　采用敏感硫电极法:配制标准硫离子溶液浓度分为1mol/L,分别稀释至1、10、20、30、40、50、60、80μmol/L,测定S离子浓度后绘制标准曲线,血清中加入抗氧化液使H2S、NaTris生成S2-,每次测定前将敏感硫电极及试管用去离子水冲洗3次,将敏感硫电极与参比电极一起浸入到样品中,测定血清H2S浓度,待读数稳定后纪录,再根据标准曲线计算出H2S的浓度。 　　1.5血清NO检测 　　采用硝酸银还原酶法:在标准管及样品管依次加入操作步骤:空白管加0.1mL双蒸水,标准管加0.1mL标准液,样品管加0.1mL血清,各管加0.1mL缓冲液,0.1mL硝酸还原酶,37℃孵育30min。加显色剂A 0.5mL,显色剂B 30.5mL,室温静置10min, 550mn比色,空白管调零,测定各管A值,按说明书给定公式计算NO浓度(测定过程严格按照说明书操作)。 　　1.6统计学处理 　　数据的统计及分析使用SPSS11.5软件,实验结果以均数±标准差(χ±s)表示,统计学方法采用方差分析。 　　 　　2结果 　　 　　模型组H2S及NO浓度同向升高,同对照组相比,具有显著差异(P0.05)。见表1。 　　 　　3讨论 　　 　　H2S及NO是近年来相继发现的气体信号分子,对机体的生理功能具有广泛的调节作用,在肝脏疾病,心血管疾病,神经系统疾病中扮演着重要角色,近年来发现,H2S及NO对疾病状态下机体的免疫功能及炎症反应起着调节作用,NO能直接介导趋化中性粒细胞及对内皮诱发的血管收