基因序列测定中不确定性的的结果分析及测序技术发展.docVIP

基因序列测定中不确定性的的结果分析及测序技术发展 　　【摘要】 目的 对HLA/MICA基因序列测定结果的不确定结果进行分析，制定相应解决方案，探讨基因测序技术发展新方向。 方法 对300人份样本分别采用商品化及自行设计HLA、MICA基因第2至4外显子扩增引物及测序引物，对基因序列测定结果的不确定结果进行统计学分析，并采用PCR-SSP及自行建立的组特异性引物测序分型法确证实验结果。结果 发现3例样本的基因分型结果不确定，应用本研究建立的双向及组特异序列引物测序分型方法确正了不确定的基因测序分型结果。HLA/MICA等位基因引物设计区存在单核苷酸多态性。结论 建立或采多种基因双向测序方法，是保证组织器官移植配型及与基因相关疾病诊断检测不可缺少的辅助检测手段。? 　　【关键词】 人类白细胞抗原;人类主要组织相容复合I类相关基因A；基因测序；多态性? 　　【中国分类号】 R52 【文献标识码】 A【文章编号】 1044-5511（2012）02-0103-02?? 　　【Abstract】 To analysis the uncertainty results for HLA/MICA genotyping in sequence-based typing (SBT), formulate the corresponding solution and discusses the new gene sequencing technology development direction. Methods A total of 300 samples were genotyped respectively by commercialization kit and designed, the results of uncertainty were used by the amplification of HLA/ MICA gene 2 to 4 exon in house group-specific sequencing primers. Results The 3 cases of sample genotype can not be determined, then we have confirmed these genotype results by in house method. There are some polymorphism single-nucleotidepolymorphisms(SNPs) in primer area in MICA allele typing. Conclusion It is necessary process that some new genotyping strategies would be established or adopted for the organization organ transplant matching and gene related diseases diagnostic.? 　　【Keywords】 Human leukocyte antigen; Human major histocompatibility complex class I chain-related gene A （MICA）; Sequencing; polymorphism?? 　　 目前国际和国内用于基因与疾病检测的DNA序列测定技术大部分是采用1977年Sanger在加减法基础上创造了双脱氧核苷酸末端终止法，它是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，通过ABI DNA测序仪进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列，可对长达1,000bp的DNA片段进行测序。这一技术的前提是对目的片断进行精确扩增，如果待测序模板片段与目的片断不匹配，则所得序列结果可能不是真实的结果，得不出精确的结果［1-2］。本研究以人类主要组织相容抗原（human leukocyte antigen，HLA）HLA复合I类相关基因A（Human major histocompatibility complex class I chain-related gene A ，MICA）HLA与人类主要组织相容复合I类相关基因A（Human major histocompatibility complex class I chain-related gene A ，MICA）基因测序为例，探讨DNA双脱氧核苷酸末端终止法DNA基因测序中应当注意的一些问题及解决策略。? 　　1 材料与方法