柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马神经元凋亡细胞相关基因表达的影响-中医诊断学专业论文.docxVIP

附录 1 31 附录 2 37 附录 3 49 摘要 摘要 柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马神经元细胞凋亡相关基因表达的影响 柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马神经元细胞凋亡相关基因表达的影响 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 10 摘 要 卒中后抑郁症(post-strock depression，PSD)是一种常见的卒中后并发症。现 代医学对 PSD 发生的机理仍处在探索阶段，其临床疗效仍不理想且副作用明显。 中医药针对 PSD 辨证论治，既能治疗中风，也能显著改善中风后抑郁状态，具有 较大的优势。目前有关卒中后神经元凋亡相关基因的表达研究越来越多且渐趋深 入，随着对凋亡基因研究的深入及对凋亡机制的阐明，用干预基因表达的方法治 疗 PSD 是可以预见的具有潜力和突破性的手段。中医对 PSD 临床辨证分型也多 以肝郁气滞为主，从调肝的角度治疗 PSD 具有一定的理论基础。柴胡疏肝散是疏 肝解郁的经典方，对 PSD 的治疗作用也得到了临床公认。对卒中和抑郁症两种病 证实验研究表明，其大鼠海马神经元均有凋亡存在。PSD 的病机远比单纯的卒中 和抑郁症复杂，PSD 大鼠海马神经细胞凋亡相关基因表达鲜有报道，柴胡疏肝散 对 PSD 的病情改善情况，还需要在动物实验中进一步验证。 目的：观察 PSD 模型大鼠海马神经元凋亡相关基因表达的变化及柴胡疏肝散干预 作用，并通过柴胡疏肝散的治疗作用，从细胞分子水平上探索 PSD 发生的机理及 柴胡疏肝散治疗机制。 方法：健康雄性 SD 大鼠 100 只，随机分为 3 组，即柴胡疏肝散治疗组、PSD 模 型组和正常组。除正常组外，其余 2 组首先线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型， 并按 longa 评分标准进行评分，手术一周后开始复合制备 PSD 大鼠模型，同时柴 胡疏肝散治疗组灌胃给药 21 天，PSD 模型组蒸馏水灌胃。造模期间给予称重及 OFT 行为学评定。各实验组多聚甲醛溶液固定后取大鼠海马组织石蜡切片， HE 染色，镜下观察海马组织病理形态及凋亡特征变化；免疫组化法检测大鼠海马组 织 Bcl-2、Bax 及 caspase-3 等凋亡蛋白表达情况。 结果：①除正常对照组外，实验大鼠经过神经缺损评分、体重变化、OFT 行为学 测试等方法检验，大多数大鼠均出现了病灶对侧肢体不同程度功能障碍，术后 1 周肢体功能有所恢复，复合造模 3 周后 PSD 模型组大鼠多数出现精神萎靡，四肢 活动减少，兴趣缺乏，体重减轻， OFT 行为学分值降低，提示 PSD 大鼠模型比 较成功。②光镜观察：正常组可见海马 CA1 区神经元排列较规则、紧密，细胞界 限清楚，细胞带较完整，细胞核较大，核仁清晰；PSD 模型组海马 CA1 区细胞排 列紊乱，神经细胞脱失严重，细胞带看不清，胞核固缩明显；柴胡疏肝散治疗组 海马 CA1 区细胞排列不很紧密，部分胞核轻度固缩，显示柴胡疏肝散治疗组海马 神经元损伤程度较 PSD 模型组有明显减轻；③免疫组化分析：各组均出现了免 疫阳性染色，但染色程度有明显差别。正常对照组海马 CA1 区神经细胞胞浆染色 很浅，柴胡疏肝散治疗组染色较深， PSD 模型组海马 CAl 区染色程度最重。与 正常对照组比较，PSD 模型组、柴胡疏肝散治疗组的 Bax 、caspase-3 蛋白阳性 表达有所升高，Bcl-2 蛋白表达有所下降（P0.01）；柴胡疏肝散治疗组与 PSD 模 型组相比，则明显下调 Bax 、caspase-3 蛋白表达（P0.01），上调 Bcl-2 蛋白表 达（P0.01）。 结论：1、PSD 模型大鼠海马神经元存在细胞凋亡现象的发生；2、PSD 模型大鼠 海马相关凋亡蛋白 Bax 、caspase-3 阳性表达增多，Bcl-2 蛋白表达有所减少；3、 柴胡疏肝散其作用可能是通过干预细胞凋亡的发生途径，增强 Bcl-2 的凋亡蛋白 表达，减少诱导 Bax 及 caspase-3 的表达，而抑制神经细胞凋亡，进而发挥对 PSD 的治疗作用，改善 PSD 临床症状。 关键词：柴胡疏肝散；卒中后抑郁；海马神经元；基因表达 英文摘要 英文摘要 柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马神经元凋亡细胞相关基因表达的影响 柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠海马神经元凋亡细胞相关基因表达的影响 The Protective Effect of Bupleurum Liver-Coursing powder on Related Gene Expression of Neuronal Apoptosis after Post-stroke depression in Rats Zhao Wenjing(Diagnostics of Traditional Chinese Medici