茶树叶片抗寒相关蛋白的筛选-遗传学专业论文.docxVIP

I I 摘 要 植物在低温作用下由于基因表达的改变而诱发合成新蛋白质。这些新蛋白质 具有高度的亲水性和热稳定性，能够保护植物细胞免受低温伤害。目前，人们对 大多数植物进行了抗冷性诱导实验，均发现低温胁迫会引起植物细胞中可溶性蛋 白质含量发生变化，并有特异蛋白的产生，且与植物的抗寒性密切相关。 茶树叶片中蛋白质的含量约占干物重的 25%，其中大部分存在于细胞质中或 与膜不紧密结合，可以用极性溶剂(如水、稀酸、稀碱或稀盐溶液)进行提取，这 部分蛋白质统称为可溶性蛋白质，包括热稳定和热不稳定蛋白质，主要为各种酶 及一些生理活性蛋白。茶树在受到低温胁迫时，其叶片组织细胞会以分解组蛋白 或是其他物质转化的方式积累大量可溶性蛋白，用此方式来增加细胞液的浓度从 而降低细胞液的冰点以抵抗低温环境。 茶树是多酚、色素含量特别高的植物，在叶片研磨时，茶多酚又极易氧化， 形成大量的氧化产物，这些物质严重干扰着电泳过程。本实验对茶树叶片采用丙 酮干粉制备法，改良丙酮沉降法和三氯乙酸-丙酮制干粉法三种蛋白质提取方法， 并对 SDS电泳结果进行了比较分析，发现利用改良丙酮沉降法提取蛋白， 不仅提取效率高，而且杂质干扰少，得到的电泳结果，蛋白条带清晰，数量多。 利用这一方法对冷驯化下不同品种茶树叶片抗寒相关蛋白进行了研究，在云抗 43 和舒茶早中分别发现了与抗寒相关的 23kd 下调蛋白和 51kd 上调蛋白，获得 了满意的蛋白 SDS分析结果。 进一步对一年生舒茶早枝条进行 4℃低温处理三天后，提取叶片的蛋白质， 进行双向电泳实验，并用 PDQuest 软件分析比较舒茶早枝条叶片在低温处理下 的蛋白表达谱，得到了 46 个量变倍数大于 1.5 倍的差异斑点，其中低温处理上 调表达的蛋白点有 31 个，减弱表达的蛋白点有 15 个，推测这些差异蛋白点可能 与低温胁迫相关。 根据资料，茶树蛋白的等电点一般集中在 4-6.5，综合双向电泳图谱上蛋白 点的重复性，分离度，表达量各因素，选取 7 个蛋白点用基质辅助激光解吸／电 离飞行时间质谱(MALDI—TOFMS)进行肽质量指纹谱的分析，并通过检索数据 库进行蛋白质鉴定与功能预测，获得了 7 个蛋白的肽质量指纹图谱，经数据库检 索鉴定分析，6 个为核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶蛋白家族，1 个为转酮醇酶。 关键词: 茶树，蛋白提取，低温胁迫，电泳，抗寒蛋白 II II Abstract Plants in low temperature induce new proteins due to the change of gene expression. These new proteins are highly hydrophilic and thermal stability, can protect plant cells from low-temperature damage. Currently, for most plants on the cold resistance induction experiment we found cryogenic stress can change soluble protein content of plant cells and product specific protein of plant hardiness closely related. The protein content of tea leaves accounted for about 25 percent of the dry matter weight, most of which exists in the cytoplasm or combines membrane not closely, can be extracted with nonpolar solvent (such as water, dilute acids, dilute alkali or dilute salt solution), the protein collectively referred to as soluble protein, including thermal stability and thermal unstable protein, mainly for various enzymes and some physiological activity protein. The leaf tissue cells of tea accumulate a huge mass of soluble protein with decomposition histone or other mater