草鱼明胶酶基因及其抑制剂基因的克隆和表达分析-水产养殖专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文 上海海洋大学硕士学位论文 II II 的功能具有一定差异性。草鱼 TIMP-2b 氨基酸序列包含一个信号肽，N-端和 C-端 结构域。草鱼 HSP60 氨基酸序列包含 ATP/Mg2+ 结合位点、一个铰链结构域和一 个环状寡聚结构。 4．利用实时荧光定量 PCR 技术对健康草鱼各组织及使用灭活嗜水气单胞菌诱 导后 4 个基因的表达谱进行检测，结果显示：4 个基因在所有被检测组织中均有表 达，表明他们可能在草鱼体内发挥广泛的作用；MMP-2 基因在血液、头肾和鳍条 发现较低的表达水平，MMP-2 基因经灭活的嗜水气单胞菌诱导，在脾脏和头肾组 织表达量，4 小时显著性上调，24 小时显著下调；MMP-9 基因和 TIMP-2b 基因均 在血液、头肾、体肾和脾脏中显著高表达，草鱼 MMP-9 基因和 TIMP-2b 基因诱导 后，所有组织的表达量均显著提高，MMP-2 在肠组织的表达量变化不显著，MMP-9 基因在头肾和心脏的的上调最具显著性；HSP60 基因在血液和肝脏组织中具有显 著高表达，HSP60 基因表达情况有明显时间节点，表达量在第三天达到峰值，第 七天表达水平与对照组相似。分析健康草鱼和细菌注射后草鱼体内 4 个基因的表 达情况，表明嗜水气单胞菌可以影响草鱼体内的明胶酶基因及其抑制剂基因的表 达情况，从而对机体产生一定的影响。 5．利用实时荧光定量 PCR 技术对 4 个基因在草鱼胚胎发育过程中的表达情况 进行检测：在卵子中均检测到 4 个基因的表达，这表明他们可能遗传于母本；其 中草鱼 MMP-9 与 TIMP-2b 基因的表达谱及其相似，表达量在后期有所升高；草鱼 MMP-2 与 HSP60 基因的表达谱比较相似，都在胚胎发育的早期具有较高的表达情 况。4 个基因均在胚胎发育早期及检测到表达，表明他们在胚胎发育过程中具有重 要的作用。尤其是 MMP-2 和 HSP60 基因在早期的高表达，表明他们可能参与到 胚胎早期的细胞分裂和组织分化的过程中。 通过以上研究结果可见，草鱼在受到嗜水气单胞菌侵袭后，体内基因表达已 发生混乱，这可能导致疾病发生并不断恶化的原因之一。4 种基因在免疫器官中的 表达量均较高，且受到嗜水气单胞菌感染后表达量都出现显著变化，证明其参与 到草鱼免疫反应当中。4 个基因在胚胎发育的早期就已存在，表明其在胚胎发育过 程中具有重要的功能。 关键词： 草鱼，明胶酶基因，嗜水气单胞菌，qRT-PCR，免疫相关基因 III III Cloning And Expression Patterns Of Gelatinase Gene And Inhibitors Gene In Grass Carp ABSTRACT Grass carp (Ctenopharyngodon idella) is one of the most impotant fresh aquaculture fishes in China. Bacterial diseases are serious problems in freshwater fish breeding process, which is a limiting factor to fresh water breeding. Use of molecular for beeding can promote the sustainable development of freshwater aquaculture, so comprehensive in-depth study of the pathogen pathogenesis and fish immune-related genes. Gelatinase gene is a kind of important immune factor, it consists of matrix metalloproteinase-2 gene and matrix metalloproteinase-9 gene. In this thesis, the grass carp MMP-2, 9, TIMP-2b and HSP60 genes were cloning and characterized. Analysis of their physicochemical properties, amino acid structure, compare their homology, by formalin inactivated Aeromonas hydrophila liquid on grass carp, study them expression change at diff