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植物苯丙氨酸解氨酶的研究进展 　　摘要苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase，PAL，E.C)是催化苯丙烷代谢途径第一步反应的酶，也是这个途径的关键酶和限速酶，对植物具有非常重要的生理意义。综述了苯丙氨酸解氨酶的存在与分布、基本特性、生理代谢意义、抗病以及基因表达与调控等，为PAL在植物抗病的应用上提供基础数据。 　　关键词苯丙氨酸解氨酶；生理作用；抗逆境；基因表达与调控 　　中图分类号S661.1文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)01-0030-04 　　 　　苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase，PAL，E.C)催化L-苯丙氨酸解氨生成反式肉桂酸，是连接初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，也是苯丙氨酸代谢途径的关键酶和限速酶。莽草酸途径产生的莽草酸通过分枝酸、预苯酸经转氨作用生成苯丙氨酸，从而进入苯丙烷类代谢途径，苯丙烷类代谢可生成反式肉桂酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸等中间产物，这些中间产物可进一步转化为香豆素、绿原酸，也可以形成CoA酯，再进一步转化为木质素、黄酮、异黄酮、生物碱、苯甲酸酯糖苷等次生代谢产物[1，2]。一切含苯丙烷骨架的物质都由该代谢途径直接或间接生成。在生物次生物质代谢中具有防紫外线伤害、抵抗病原体的侵害、保持花粉生活力及形成植物花青素等多种重要作用。该酶在不同组织中、不同的内外因素调节下，含量水平及其基因表达的时空方式均有所不同。 　　 　　 　　1PAL的存在和分布 　　 　　1961年Koukal和Conn首次在绿色植物大麦幼苗中发现了PAL，并进行了分离纯化[3]。随着研究的深入，该酶已被固定化，用于工业化生产苯丙氨酸。至今，PAL已在所有绿色植物中发现，在真菌、细菌、藻类中也有存在。不同植物中PAL活性不同，在同一株植物的不同组织部位，PAL活性也不同。一般越嫩的部位PAL活性越高，如杨树的幼叶、顶芽、幼茎中PAL活性最高，而老茎和成熟叶中PAL则较低[4]。 　　在细胞水平上，植物PAL主要分布在表皮下的细胞和维管组织细胞中；在亚细胞水平上，PAL定位于细胞质和一些细胞器上，如叶绿体、白色体、线粒体、过氧化酶体、乙醛酸体等。Nakushima等进行了PAL的亚细胞定位，发现细胞间质部分PAL活性最高，电子显微镜观察显示，PAL分散在细胞的基质中，定位在高尔基体囊泡和次生壁加厚层中[5]。 　　 　　2PAL的基本特性 　　 　　PAL是一种胞内诱导酶，酶蛋白是一种含有4个相同亚单位的寡聚体，氨基酸组成随不同来源而异，如水稻PAL氨基酸组成中酸性氨基酸成分低于小麦、玉米和马铃薯，而中性及碱性氨基酸成分则高于后三者[6]。在酶活性部位具有脱氢丙氨酰基的亲电中心。酶蛋白分子量一般在220～330 KDa，但不同来源稍有差异，如马铃薯PAL分子量为330KDa，玉米为306KDa，小麦和水稻PAL分子量分别为280KDa和230KDa[1]。不同来源的PAL最适pH值在8.0～9.5。如甘薯PAL最适pH值为8.5～9.5，水稻为9.2，小麦为8.8，与其氨基酸组成相一致[7]。 　　该酶的动力学曲线不符合米氏方程，不规则，具有别构酶的特征。大多数PAL的米氏常数(Km)在0.3×10-4～1.5×10-2mmoL/L，水稻PAL的Km为5.94×10-4mmoL/L；而小麦PAL的Km有2个，分别为0.625×10-4 mmoL/L和3.1×10-4mmoL/L[1，6]。 　　 　　3PAL对植物生理代谢的意义 　　 　　植物的代谢分为初级代谢和次级代谢。植物的次级代谢有多条途径，苯丙烷类代谢途径是其中很重要的一条。苯丙烷类途径生成的黄酮、异黄酮、生物碱等次生代谢产物在植物的生长发育过程中起着重要的作用，所以PAL对植物的生理意义非常重大(见图1)。 　　 　　3.1在木质化中的作用 　　 　　在植物的木质化组织中含有较高的PAL活性。Nakashima等用分离的百日草叶肉细胞研究了苯丙烷类代谢酶类与木质素、管状分子形成和细胞分化的关系，发现在百日草细胞分化过程中，木质素的合成及管状分子形成与PAL活性的增加成正相关，细胞溶质中的PAL活性在木质化之前迅速上升，微粒体和细胞壁的PAL活性在木质化期间快速增加[5]。 　　 　　3.2在植物色素形成过程中的作用 　　花色素是植物花朵、果实和叶片颜色的重要组成部分，花色素等的合成可由苯丙烷类产物反香豆酰CoA经过类黄酮途径生成，该过程与PAL密切相关。如苋红素是中央种子目植物所特有的色素，当用白光、蓝光或红光照射尾穗苋黄化苗后，发现PAL活性均有不同程度地上升，并有苋红素的积累[8]。有人通过调