凡株不同宿主副粘病毒的分离鉴定和F基因的克隆与序列研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

几株不同宿主副粘病毒的分离鉴定 和 F 基因的克隆与序列分析 摘 要 1998-2000 年间 在上海嘉定 南汇 宝山等地区的鸽群发生鸽 新城疫的流行 鸽群临床上突然出现剧烈下痢 食欲废绝 饮水增 加等症状 我们在发病鸽身上分离到的病毒PV 株经血凝抑制 试验和电镜观察证明是鸽副粘病毒新城疫毒株血凝性为 26 脑内接种指数ICPI为 0.88 鹅副粘病毒感染在 90 年代末渐渐流行起来 目前在中国大陆的流 行有增强的趋势 我们在 2000 年间 也分离到一株毒株GV 株 临床症状与鸡新城疫较为相似 也出现食欲废绝 饮水增加和神经 症状 毒株经血凝抑制试验和电镜观察 表明为鹅副粘病毒 而且 与新城疫病毒存在极大的相关性 应该是禽副粘病毒的又一分支 毒株血凝性为 26 2001 年 我们在临床症状复杂的猪群中 分离出一株病毒SV 株临床抗菌素治疗的情况及按照猪呼吸繁殖综合症 伪狂犬病和 猪瘟病等方法处理 均未取得理想效果的情况 结合病毒分离的结 果 作者认为 此次流行的猪传染病可以初步诊断为猪副粘病毒感 染 有高热的病例可能混合感染其他致病性微生物 毒株血凝性为 25 经互联网查询和参考文献的叙述 此次我国猪副粘病毒感染与 国外流行的猪蓝眼病 Menangle 病及 Nipah 病相类似 但此次猪副 粘病毒仅在猪群中流行 目前没有感染人发病的情况发生 猪副粘 病毒病在我国刚刚被认识 其病原特性 传播规律和致病病理及公 共卫生等问题都急待进一步研究 对于分离到的三株副粘病毒 我们用鸡胚培养收集尿囊液 用 差数离心法纯化病毒 然后采用柱式离心试剂盒抽提病毒 RNA 基因 组 得到质量较好的 RNA 参考国外已发表的文献设计了一对引物 用反转录 聚合酶链式反应RT-PCR对它们的 基因进行分段扩 增 定向克隆到 pUC119 质粒载体 然后筛选阳性质粒测定它们的 核苷酸序列 并推导出相应的氨基酸序列 PV 株 GV 株和 SV 株的 F 基因全长 1662bp 编码 553 个氨基 酸 它们的裂解位点的氨基酸序列为 112G-R/K-Q-G-R-L117 是 NDV 弱毒株特有的序列结构 序列分析结果表明 参与比较的 5 个毒株 F 基因核苷酸变异幅度在 0.72% 12.64%之间 其中 PV 株和 GV 株 的同源率高达 99.28% 说明他们虽然分离自不同的宿主 但很有可 能是同一株病毒引起的 他们两株与 Las99 株也有较高的同源率 分别达到 98.50%和 98.74% 而它们与 F48E9 的同源率则较低 分 别只有 87.48%和 87.36% SV 株与 PV 株 GV 株和 Las99 株的同源 率基本相同 都在 91%左右 而它与 F48E9 的同源率则相对较低 但差距不大 为 87.48% 这一点是值得注意的 证明猪副粘病毒与 典型的禽副粘病毒之间存在着不以毒力强弱为方向的一定程度的变 异 有其独特性 需要更深入的研究 氨基酸同源性分析表明 F 蛋白的氨基酸同源率在 91.50% 100%之间 由于存在沉默突变 氨 基酸的同源率一般要高于核苷酸的同源率 而本研究中不同毒株间 的同源率比较分析结果也大致符合这一规律 本研究对三株从不同宿主身上分离到的副粘病毒进行了较为深入 的研究 得到了它们 F 基因的全序列 其中猪副粘病毒 SV 株的 F 基因全序列应该是国内第一次得到 颇具意义 为今后的研究提供 了珍贵的参考资料 从试验结果来看 副粘病毒感染呈现出多样化 的趋势 毒株之间存在着一定程度的变异 这样的变异是否是宿主 特异性的 目前我们还无法作出定论 需要进一步深入的研究 相 信随着技术水平的不断发展和资料的积累 人们终究能够完全地揭 示出副粘病毒的秘密 最终克服这一危害严重的疾病 关键词 鸽副粘病毒 鹅副粘病毒 猪副粘病毒 F 基因 克隆 序列分析 THE IDENTIFICATION AND SEQUENCING OF FUSIONG GENE OF THREE PARAMYXOVIRUS ISOLATED FROM DIFFERENT HOSTS ABSTRACT The Newcastle Disease broke out in the pigeons of Jia ding, Nan hui, Bao shan districts, Shanghai during 1999-2000. The main symptoms of the pigeons were acute diarrhea and thirsty. The virus strain(PV strain) isolated from the infect